【實驗目的】?

1. 本實驗通過復制急性實驗性DIC動物模型。

2. 測定幾項血液學指標，觀察DIC時血液凝固性變化，并分析這些變化的原因和急性DIC的發病機制。

3. 了解急性DIC的實驗室檢查方法。

【實驗原理】?

DIC是指在某些致病因子作用下，凝血因子和血小板被激活，引起血管內微血栓形成，同時或繼發纖溶亢進，從而出現器官功能障礙的病理過程。在DIC發生發展過程中，各種凝血因子和血小板因大量消耗而明顯減少，纖維蛋白降解產物（FDP）增多，引起出血和器官功能障礙。

【器材和藥品】?

電熱恒溫水箱、分光光度計、離心機、顯微鏡、血細胞計數板、兔解剖臺、哺乳類動物手術器械、秒表、小試管架、12mm×75mm和12mm×100mm試管、刻度離心管、0.5 ml吸管、血紅蛋白吸管、藥物天平、1.5mm外徑硅膠管。

4%兔腦粉生理鹽水浸液、K試液、P試液、1%硫酸魚精蛋白液、0.025mol/L氯化鈣溶液、血小板稀釋液、3%戊巴比妥鈉溶液、3.8%枸櫞酸鈉溶液、生理鹽水、飽和氯化鈉溶液、5%葡萄糖（GS）溶液。

【實驗對象】?

家兔，雌(未孕)、雄不拘，重2～2.5kg。

【方法和步驟】

1. 實驗兔一只，稱重。用3%戊巴比妥鈉按1.0 ml/kg由耳緣靜脈緩慢注入麻醉(每分鐘不超過1毫升)。麻醉后將動物仰臥固定于兔解剖臺上，必要時將實驗臺底面燈開亮作保溫用,剪去頸部手術野的被毛，常規暴露一側頸總動脈，插入硅膠管，作取血樣本用。

2. 靜脈滴注5%葡萄糖（5ml/kg），在8～10min滴完后，取4%兔腦粉生理鹽水浸液，按2.0ml/Kg體重計算，將總量用生理鹽水稀釋至30ml，由耳緣靜脈注射（可用頭皮靜脈針），在15min內注完。其注入速度為：第一個5min以1.0ml/min注入；第二個5min以2.0ml/min注入，最后5min以3.0ml/min注入。

3. 在注入兔腦粉浸液前5min，注入后15min及45min，分別由頸總動脈取血樣本一次（每次取血樣前先廢棄血液數滴），抗凝劑（3.8%枸櫞酸鈉溶液）與血液之比為1∶9（V/V），3000r/min，離心15min，獲得含微量血小板血漿作為大部分實驗測定用。每次取血樣本時，采血1～2滴供血小板記數用。

4. 對照兔一只，不注射兔腦粉浸液而改為注射生理鹽水，注入途徑，總量，速率和取血樣本時間等均與實驗兔相同。

5. 幾項血液學檢查

（1）白陶土部分凝血活酶時間（KPTT）測定

① 取被檢血漿0.2ml，加入小試管內，置37℃水浴中，然后加入K試液0.2ml，混勻，孵育3min；

② 加入0.025mol/L氯化鈣溶液0.2ml，同時開動秒表，10s后將試管從水浴中取出，輕輕的側動，直至液體停止流動（呈膠凍狀）或出現白色粗顆粒時，即為凝固終點；

③ 重復操作2～3次，取平均值。

（2）凝血酶原時間（PT）測定

① 取被檢血漿0.1ml，置于小試管中，放入37℃水浴中；

② 加入p試液0.2ml，開動秒表，觀察方法同上，測定凝固時間；

③ 重復操作2～3次，取平均值。

（3）凝血酶時間（TT）測定

① 取被檢血漿0.2ml，置于小試管中，放入37℃水浴中；

② 加入適宜濃度的凝血酶懸液0.2ml，開動秒表，觀察方法同上，測定凝固時間；

③ 重復操作2～3次，取平均值。

（4）血漿魚精蛋白付凝實驗（3P實驗）

① 取被檢血漿0.45ml，置于小試管中；

② 加入1%硫酸魚精蛋白液0.5ml，混勻，在室溫下放置30min，于觀察前輕輕搖動試管，有白色纖維或凝塊為陽性，均勻渾濁，無白色纖維者為陰性。

（5）纖維蛋白原定量（飽和鹽水法）

① 取被檢血漿0.5ml，置于12mm×100mm的試管中，加入飽和氯化鈉溶液4.5ml，充分混勻，置37℃水浴中孵育3min，取出后再次混勻，用分光光度計比色，測定光密度；

② 以生理鹽水代替飽和氯化鈉溶液，進行同樣操作，作為對照；

③ 用對照管調零點，測出光密度（波長520nm）后，按下式計算纖維蛋白原含量；

（測定管光密度/0.5）× 10 = g/L

（6）血小板記數（BPC）

吸取血小板稀釋液0.38ml于一試管內，用血紅蛋白吸管吸血20μl立即加入血小板稀釋液內，充分搖勻后，用滴管將上述混懸液一小滴滴入計算室內，靜置15min后，用高倍鏡記數，數5個中方格內之血小板數×109/L即可。

【注意事項】

1. 本實驗中,兔腦粉浸液的制備及注射速度對實驗成敗影響很大。在注入兔腦粉浸液的過程中，密切觀察動物的呼吸情況，必要時酌情調整注射速度。

2. 本實驗中所用試劑，血漿樣本及吸管較多，同一吸管只能吸取某一試劑或血漿樣本，避免交叉使用。

3. 恒溫水浴中的水溫應維持在（37±0.5）℃。

4. 如室溫較低（20℃以下），血漿放在37℃恒溫水浴中保溫1 min。

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附錄：

1. 適宜濃度的牛凝血酶懸液：將牛凝血酶懸液以正常人血漿作基質，將凝固時間調至15～18s。

2. K試液：實驗前將2%白陶土生理鹽水懸液1份與兔腦磷脂懸液等量混合，作KPTT測定用。

3. P試液：實驗前稱取200mg兔腦粉，加入5ml生理鹽水，重復混勻后放入37℃水浴中孵育1h，在此過程中，間歇用玻棒攪拌3～4次，并顛倒混勻，然后離心（1000r/min）5min，吸取上清液，再加入等量的0.025mol/L氯化鈣溶液，用前搖勻，作PT試驗用。

4. 1%硫酸魚精蛋白液：取硫酸魚精蛋白1g,用生理鹽水配制成100ml,再以2%碳酸鈉溶液調pＨ至6.5，用濾紙過濾后，置普通冰箱保存備用（或用市售1%魚精蛋白注射液）。

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