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  • 實驗方法> RNA實驗技術> RNA原位雜交>RNA酶保護試驗((RNase?Protection?Assay,RPA)簡介

    RNA酶保護試驗((RNase?Protection?Assay,RPA)簡介

    關鍵詞: rna 酶 保護 試驗來源: 互聯網

    RNA酶保護試驗((RNase Protection Assay,RPA)是通過液相雜交的方式,用反義RNA探針與樣品雜交,以檢測RNA表達的技術。 1。原理:雙鏈RNA(雜交的)能夠抵抗RNA酶的降解。 2。應用:檢測RNA表達 3。與Northern雜交和RT-PCR比較,RPA有以下幾個優點: 1. 檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失,使靈敏度下降,而RPA將所有雜交體系進行電泳,故損失小,提高了靈敏度。 2. 由于PCR擴增過程中效率不均一和反應“平臺”問題,基于PCR產物量進行分析所得數據的可靠性將下降,而RPA沒有擴增過程,因此,分析的數據真實性較高。 3. 由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA樣品仍可進行分析。 4. 步驟較少,耗時短。與Northern雜交相比,省去了轉膜和洗膜的過程。 5. RNA-RNA雜交體穩定性高,無探針自身復性問題,無須封閉。 6. 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交,無競爭性問題。 7. 檢測分子長度可以任意設置,靈活性大。 RPA的缺點是需要同位素標記探針。

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