有關Stealth? RNAi的問題 什么是Stealth? RNAi？ Stealth? RNAi是RNAi化學的新一代產品。Stealth? RNAi分子是經過專利化學修飾的、鈍末端、雙鏈25聚體（25mer）。這些化學修飾專門用來消除誘導的細胞應激反應。它也使Stealth? RNAi比標準的siRNA在血清中更穩定，通過確保Stealth? RNAi雙鏈中只有反義鏈進入RNAi通路，減少脫靶效應（off-target）的可能性。 如何設計Stealth? RNAi？ RNAi Designer 免費在線工具是設計有效Stealth? RNAi的理想工具。RNAi Designer使用獨特的、基于公開設計法則的算法（algorithm），復雜的同源消除以及獲得的來自invitrogen廣泛的成功的RNAi實驗室數據。使用RNAi Designer，你可以設計獨一無二的Stealth TM RNAi分子，來靶定目的mRNA分子，進行有效的基因阻斷。如果你現在已經有一個效果良好的siRNA 序列，把它轉變成有效的雙鏈Stealth? RNAi非常簡單，同時你可以獲得Stealth? RNAi所有的優點。 如何知道siRNA或者Stealth? RNAi不會靶定其它的基因？ RNAi Designer利用嚴格的設計法則選擇Stealth? RNAi，選擇的Stealth? RNAi對于你所選擇的有機體是獨一無二的。由于只有反義鏈能夠產生RNAi反應，因而Stealth? RNAi是消除這些問題的最有效的方法。 我需要多大量Stealth? RNAi？ Stealth? RNAi以20 nmole 退火雙鏈提供，提供24孔板大約2000次轉染。如果有要求，invitrogen可以提供大規模選擇序列的合成。 如何我能夠知道使用什么序列？ 你可以使用RNAi Designer在線工具設計Stealth? RNAi的序列。Invitrogen 客戶服務也可以幫助你設計和在目標細胞類型中驗證序列。 Stealth? RNAi有多穩定？我能夠在體內研究中使用它嗎？ 在血清中Stealth? RNAi明顯的要比siRNA穩定。增加穩定性特別有利于體內研究，在體內RNAi可能暴露到更多的核酸酶中。通過與Introdigm合作，已經證實Stealth? RNAi體內腫瘤內注射具有活性。 是否BLOCK-iT? Basic RNAi Control Kit 和 Transfection Optimization Kit中的熒光oligo（fluorescent oligo）修飾作Stealth? RNAi？ 熒光oligo是修飾的熒光標記的dsRNA。RNA上的這種修飾促使它以一種清晰和穩定的方式定位到細胞核，使得它成為轉染的一種出色的對照。相反，簡單的熒光素標記的siRNA導致模糊的模式，難以區分熒光oligo是進入細胞或者是僅僅黏附到細胞的外面。 我是否可以使用BLOCK-iT?熒光oligo優化質粒轉染？ 已經顯示BLOCK-iT?熒光oligo的轉染與Stealth? RNAi和siRNA的轉染相關，但是DNA和BLOCK-iT?熒光oligo的相關性還沒有進行檢驗。 一般RNAi問題： RNA干擾（RNAi）是如何被發現的？ 1990年，Jorgenson 和 Mol在研究一種模式植物系統的工作中，第一次發現RNA干擾現象存在的跡象。存在天然色素基因附加拷貝的矮牽牛花（Petunias）似乎以某種方式同時阻斷了天然和插入色素基因的表達，被稱之為協同抑制。幾年后，研究煙草的另外一個小組發現，病毒能夠啟動特異基因的抑制。Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello在實驗室中發現注射dsRNA到線蟲（C. elegans），導致與導入dsRNA同源的那些特異基因表達的沉默，而后，在1998年nature上發表的文章中創造了術語RNAi 。 RNAi 天然生物學功能是什么？ 幾乎所有的植物和動物細胞都具有利用siRNA的內部機制，使用siRNA抑制特殊基因的表達。RNAi進化的機制，似乎是為了保護基因組免于內源轉位因子和病毒感染的損害。RNAi可能在細胞中有正常的功能性作用，在生長和發育期間抑制一些基因的表達。 RNAi優于用來進行組斷基因表達的其它方法的優點是什么？ 基因敲除和轉基因動物是功能缺失表型研究的主要方法。然而，獲得這些動物是一個漫長而且費用昂貴的過程，同時很多基因的缺失會導致胚胎致死表型，使得基因敲除變得不再可能。 滅活蛋白功能的方法包括結構域陰性突變構建和分析，和使用抗體和aptamers。但是，這可能需要花費一些時間確定什么構型和結構有功能，而且它們似乎只對某些靶標有作用。 有兩種方法被用來調節mRNA的更新，反義mRNA和核酶（ribozyme）。但是這兩種方法的應用有很大的限制。 RNAi是快速鑒定基因功能而費用低廉的方法，似乎對于到目前為止檢測的大多數基因效果良好。RNAi迅速成為在敲除目的基因表達方面使用更多的方法。RANi對于了解基因功能，信號通路分析，RNAi機制研究和靶標驗證非常有用，同時展示了診斷學和治療學的巨大潛力。 獲得短的干擾RNA（siRNA）的方法有哪些？ 獲得導入哺乳動物細胞siRNA的3種最常用的方法： · 體外轉錄和Dicer酶切（dicing） · 合成siRNA · 帶有RNAi框的載體 siRNA和diced siRNA（d-siRNA）之間有什么差別？ 二者的分子結構是相同的，dicer將長dsRNA特異的裂解為21-23個核苷酸雙鏈，具有siRNA標志的兩個核苷酸的突出。主要的差別是d-siRNA是包含一個來源于一個完整全長的dsRNA靶標的siRNA庫，而siRNA通常是指特異針對專門靶定區域的單一序列，通常合成為單一Oligo或者特異幾種Oligos混合物。 如何測量RNAi的效果？ 檢測基因特異阻斷的最常用的方法是進行western blot分析，比較導入siRNA前后蛋白表達水平的變化。在一些情況下可能使用檢測報告子基因的報告子系統例如β-半乳糖苷酶。也可以應用實時PCR（例如通過使用LUX?引物）或者其它類型基于細胞的分析檢測細胞中轉錄本的水平。