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  • 實驗方法> RNA實驗技術> RNA原位雜交>siRNA表達框架

    siRNA表達框架

    關鍵詞: sirna 表達 框架來源: 互聯網

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    siRNA表達框架(siRNA expression cassettes,SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達模版,能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。這個方法最早是由Castanotto和其同事采用,包括一個RNA polⅢ啟動子,一段發夾結構siRNA,一個RNA pol III終止位點。與siRNA表達載體不同的是,SECs不需要載體克隆和測序等頗為費時的步驟,可以直接由PCR得到,耗時不到一天。因此,SECs成為篩選siRNA的最有效工具之一,甚至可以用來篩選在特定的研究體系中啟動子和siRNA的最適搭配。如果在PCR兩端添加酶切位點,那么通過SECs篩選出的最有效的siRNA后,可以直接克隆到載體中構建siRNA表達載體。構建好的載體可以用于穩定表達siRNA和長效抑制的研究。 該方法的主要缺點是PCR產物很難轉染到細胞中。如果有適合的新型轉染試劑能提高SEC的轉染效率該問題就可以解決了。另外,沒有克隆到載體中的PCR片斷并不適于大規模制備。 最適用于:篩選siRNA序列,在克隆到載體前篩選最佳啟動子 不適用于:長期抑制研究。(如果克隆到載體后就可以了)

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