RANi術語表
RNA干擾是最近發現的一種功能工具。當RNA導入一個細胞時,最終會引起細胞內互補mRNA的降解,從而導致基因功能活性的阻斷。
PTGS轉錄后基因沉默(posttranscriptionalgenesilencing);一種首先在植物中確定,然后發現在動物中也存在的現象。盡管PTGS最初被描述作一種病毒防御和轉位子沉默的內源方法,現在它已經成為一種新的令人激動的研究工具RNAi干擾。
協同抑制(Cosuppression)基因沉默的一種特殊情況,來源于轉基因的RNA與同源內源基因同時被抑制。
靜息作用(Quelling)用于在粉色面包霉菌(Neurosporacrassa)中描述協同共抑制。這個術語僅僅用來在真菌中描述沉默。
dsRNA雙鏈RNA(Double-strandedRNA);通常指長的或者全長的RNA雙鏈。這些大的dsRNA在大多數哺乳動物細胞類型中全面啟動宿主細胞的關閉(shutdown);隨后細胞開始降低非靶標基因的表達,最終經歷凋亡(apoptosis)。
siRNA短的(或者小的)干擾RNA(Short(orsmall)interferingRNA);哺乳動物細胞參與引起RNAi反應的21-23核苷酸的短的RNA雙鏈。
RISCRNA誘導沉默復合體(RNA-inducedsilencingcomplex);即所推測的多蛋白復合物,將siRNA和細胞內mRNA結合到一起,激活裂解機制(可能是內切核苷酸的),釋放mRNA并進行降解。
shRNA短的發夾RNA(ShorthairpinRNA);也稱短的干擾發夾(shortinterferinghairpin);在體內通過RNAi降低互補序列基因的表達。
PolIII啟動子PolIII啟動子U6或者HI(PolIIIpromoter,U6orHI),通常用來驅動shRNA的產生。PolIII啟動子具有在某一確定起始位點上游啟動轉錄所需要的全部元件。
PolIII終止子PolIII終止子(PolIIIterminator);4個或者更多個T,提供PolIII依賴的轉錄終止。
U6啟動子U6啟動子(U6promoter)一種polIII型啟動子,允許產生確定末端的小RNA(參看polIII啟動子)。
入門載體(entryvector)包含attL位點,用來克隆DNA片段的Gateway?載體。U6入門載體,pENTR?/U6,專門設計使用U6polIII型啟動子和終止子序列,RNAi靶序列克隆進入后將在哺乳動物細胞中形成shRNA。
目的載體(destinationvector)Gateway?適合的目的載體(DEST)包含attR位點,可以與入門克隆進行重組,構建表達載體。BLOCK-iT?RNAi慢病毒和腺病毒DEST載體接受來自U6入門載體的RNAi框。此外,也有在原核、酵母、昆蟲或者哺乳動物系統表達天然蛋白或者融合蛋白的DEST載體可供選擇。
LRClonase?便于attL和attR位點在LxRGateway?重組反應中進行重組的一種酶混合物,可以把DNA序列從入門載體轉移到目的載體。