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  • 實驗方法> RNA實驗技術> RNA原位雜交>trizol法提取血中的RNA,怎樣做量會更多?

    trizol法提取血中的RNA,怎樣做量會更多?

    關鍵詞: trizol 提取 血中 rna來源: 互聯網

    問:trizol法提取血中的RNA,怎樣做量會更多?提完RNA加DEPC水后放-80度也會容易講解嗎?

    答:

    1 血要新鮮。如果是凍存的,在解凍時要完全,之后再加Trizol。

    2 可以稍多加一些Trizol,少加些血。混勻之后放置10分鐘左右,直接加三氯甲烷,混勻再去離心。

    可以不用先離心去沉淀之后再加三氯甲烷。

    3 每個步驟操作要快,用的時間藥短些,防止降解.

    4 異丙醇沉淀的時候,放-20°C的冰箱半個小時,或再適當延長一點時間。迅速離心,之后加75%乙醇。只洗一遍,洗2遍易損失部分RNA。

    5 不要過分干燥,管內稍有點殘余的乙醇也沒關系。干燥一會就迅速加DEPC水少量。一般我都加的30.如果需要濃度高點可以少加水。

    6 提取RNA之后迅速反轉錄成cDNA再保存。

    RNA直接凍存會降解。也會影響以后反轉的效率。

    (責任編輯:大漢昆侖王)
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