RNAi動物實驗的簡單方法——體內轉染
摘要:由于RNAi實驗技術的推廣和應用,人們在體外培養細胞中進行RNAi實驗已經比較容易。隨著研究的深入,人們需要將研究擴展至更自然的細胞和體內環境。一種像做體外轉染一樣的簡單易用的方法已經出現,這就是動物體內轉染試劑。
由于RNAi實驗技術的推廣和應用,人們對特定基因"敲除"或"沉默"變得越來越簡單,研究也越來越多。在體外培養細胞中進行RNAi實驗已經比較容易,人們只需要選擇合適的培養細胞系,用特定的核酸和轉染試劑即可完成相應的轉染。
隨著研究的深入,人們需要將研究從經過人工改造的細胞和模擬的簡單的人工培養環境,轉向自然的細胞和體內自然復雜的環境,揭示更符合真實自然的疾病和生命秘密,并向應用更進一步。
但以前動物實驗往往讓人望而卻步,主要的原因是沒有簡單可靠的方法進行,花費的時間和周期長,達不到預期的效果。以前人們如果想在動物體內進行基因轉移實驗,主要是通過腺病毒或慢病毒的方法進行。病毒感染的方法主要過程是,構建相應的病毒載體,然后在細胞中進行病毒包裝。通常情況下包裝一次病毒至少幾個月,花費幾萬到十幾萬,如果實驗重復,這個時間和花費就更大了。病毒感染的方法,由于是病毒主動侵襲,一般認為效率高。
但在實際應用過程中,由于包裝過程復雜,任何一個環節出錯,都有可能導致包裝失敗或包裝出來的病毒效率低下。此時,由于環節眾多,往往不易查找原因。對采用病毒包裝進行RNAi實驗來說,由于需要選擇具有最佳干擾效率的核酸序列,往往需要不斷調整,如果每次調整都需要重新包裝病毒來說,那么效率就太低下了,同時花費也非常大。而且,病毒還存在對研究者和環境的生物安全的問題。
那么有沒有像體外細胞轉染一樣簡單易用的方法呢,只需要花幾百元合成小片斷RNA,然后用轉染試劑就完成轉染。很多研究者已經進行過嘗試,他們發現,如果簡單用體外轉染試劑進行轉染,會面臨幾個問題。
首先是體外培養基和動物體內的體液系統是完全不同的,一些適合體外轉染的轉染試劑,如脂質系統,是很容易被體內的體液系統所破壞和免疫清除的。其次是一些轉染試劑在體外進行時,毒性已比較明顯,如果進行體內轉染,那么動物發生炎癥反應的比例也會很高,這樣不僅不能產生良好的轉染效果,而且干擾了實驗效果,甚至導致動物的死亡。所以,一些普通的體外轉染試劑是不支持進行體內轉染的。
如果需要在動物體內采用轉染試劑進行轉染,這要求:
1.轉染試劑能耐受體內復雜的環境,不會被體內免疫系統識別清除,產生免疫反應。
2.轉染試劑效率要高,毒性要低,眾所周知,原代細胞比傳代細胞要難轉染得多,而體內轉染又要比體外轉染要難。所以轉染的效率一定要高,同時,毒性要低,這樣才能產生顯著的轉染效果,以利于實驗觀察。
英格恩生物近期推出的動物體內專用轉染試劑EntransterTM-in vivo,非脂質體,采用納米技術合成,能耐受體內復雜的環境,不產生免疫反應。而且轉染效率高,方法簡單。只需要將核酸和轉染試劑稀釋混合,無需過濾,即可直接注射動物進行實驗。EntransterTM-in vivo的價格也非常合適,只相當普通的體外轉染試劑的價格。對需要動物實驗,經費、時間和實驗條件有限的實驗室來說,無疑是好消息。
EntransterTM-in vivo動物體外轉染試劑雖然推出時間不長,但由于其方法、價格和效果上的突出優點,已被許多實驗室采用,并有相當的應用文獻發表。