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  • 實驗方法> RNA實驗技術> RNAi>RNAi 知多少

    RNAi 知多少

    關鍵詞: RNAi 概念 關系來源: 上海達為科

    隨著 RNAi 現象的發現和研究到 microRNA 成為全球生物研究者關注的熱點,與其相關的各種概念不斷刷新我們的認識,siRNA、shRNA、microRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、microRNA mimic、microRNA inhibitor 、agomir、antagomir,各種 RNA 讓剛剛接觸 RNAi 的人頭昏腦漲,那么,現在讓我帶大家認識一下他們各自有什么特點,有什么關系。siRNA 是 dsRNA 在 Dicer 酶作用下裂解成 21-25 個核苷酸的小干擾 RNA,化學合成的 siRNA 一般正義鏈和反義鏈都是 21 個堿基,正義鏈是 19 個堿基的靶序列加 3‘ 端 TT 懸頭,反義鏈是 19 與正義鏈互補的堿基加 3 ‘端 TT 懸頭。shRNA 即 short hairpin RNA,shRNA 表達載體 在polIII 啟動子控制下轉錄的短發夾 RNA,包括兩個短反向重復序列,中間由一莖環(loop)序列分隔的,組成發夾結構,3 ‘端有 UU 懸頭,一個已知有效的 siRNA 序列如果需要較長一段時間內維持沉默效應,則 shRNA 系統是更優選擇。成熟的 miRNA 是由較長的初級轉錄物經過一系列核酸酶的剪切加工而產生的,初級轉錄物稱為 pri-miRNA。pri-miRNA 長度從幾百到幾千個堿基不等,帶有 5‘帽子和3’polyA 尾巴,以及 1 到數個發夾徑環結構。Pri-miRNA 經剪切產生約 70 個堿基的 miRNA 前體,即 pre-miRNA。pre-miRNA 為單一發夾結構,5‘帶有磷酸基團,3’有兩個突出堿基,并帶有 3’羥基。pre-miRNA 經進一步剪切,形成長度約為 22 個堿基的單鏈成熟 ?miRNA。microRNA mimic 是模擬活體 microRNA活性來能增強內源性 miRNA 的功能的 microRNA 模擬物,化學合成有單鏈的也有雙鏈的。microRNA Inhibitor 是化學合成的成熟 miRNA 互補單鏈,用來抑制內源性的 microRNA 的功能。特異的 microRNA inhibitor 能夠被導入到表達特異的 microRNA 的細胞內,抑制 microRNA 的作用,也可以用來抑制表達特異的內源性的 miRNA 的報告載體的表達。Agomir(microRNA 激動劑)是經過特殊標記和化學修飾的雙鏈小 RNA ,通過模擬內源性的 microRNA 來調節靶基因的生物學功能。antagomir 是根據 microRNA 成熟體序列設計,經過特殊標記與化學修飾的單鏈小 RNA ,是專門用于抑制內源性 microRNA 的高效阻斷劑。??

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