一、原理

基因組DNA 文庫包括了基因組所有順序的隨機克隆片段。一個好的基因組DNA 文庫的大小應足夠大，以便包括所有的基因DNA 順序。DNA 克隆片段也應足夠大，其中包括整個基因、連接基因及它們穩定形式所要的側翼順序。為了獲得高的克隆效率和較大的插入片段，λ噬菌體載體和質粒經常被使用構建基因組DNA

文庫。λ噬菌體文庫易于操作，噬菌體載體上有多克隆位點。λ噬菌體能容納10 -50 kb 插入DNA，載體類型應根據所要基因組DNA 片的大小和用途來選擇。

構建一個基因組DNA 文庫的基本步驟：

① 分離純化基因組DNA ；

② 切割DNA 成合適大小的片段以用于克隆；

③ 載體DNA 的制備；

④ 把基因組DNA 片段和載DNA 連接；

⑤ 包裝重組分子；

⑥ 測定入噬菌體滴度；

⑦ 擴增DNA 文庫；

⑧ 評估文的質量。

二、材料

1、培養基

LB 肉湯；LB 瓊脂平板；LB 頂層瓊脂糖。

2、緩沖液

( 1 ) TSP ：

2 ml 2 mol / L Tris -HCl( pH 7.9 )

10 ml 0.1mol / L 亞精胺

10 ml 0.1mol / L 腐胺

78 ml 水

( 2) DMSO / ATP 溶液：

按順序加入下述溶液，加ATP 之前需冷卻。

85 μl 水

100 μl DMSO（二甲基亞砜）

15 ml 0.1mol / L ATP ( pH7.0)

( 3 ) SMC 溶液：由SMCA 和SMCB 新鮮配制。

( 4) SM 稀釋緩沖液：

0.1mol / L NaCl

0.01mol / L MgSO4

0.1 mol / L Tris -HCI ( pH 7.5)

3、試劑和酶

1 ) Bam HⅠ；SauⅠ；NaeⅠ

2 ) T4 DNA 連接酶

3 ）λ噬菌體。

4 ）宿主菌

5 ）對照λDNA