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  • 實驗方法> DNA實驗技術> DNA基礎知識>Feulgen反應步驟

    Feulgen反應步驟

    關鍵詞: Feulgen 反應 步驟來源: 互聯網

    標本需經固定后方可染色,Carnoy固定液可按無水乙醇:三氯甲烷:冰醋酸為6:3:1比例配制。固定后石蠟切片即可。盡量不用新鮮組織恒冷箱切片,因胞質中存在的縮醛磷脂會出現非特異染色。若必須使用恒冷箱切片,需做切片后固定。用已固定的組織石蠟切片可消除縮醛磷脂。減少非特異染色,具體操作如下:

    1.切片脫蠟入水;

    2.用lmol/L HCl浸洗;

    3.切片放人預熱到60℃1mol/LHCi內6分鐘,(固定的標本為10~15分鐘.Susa固定的標本為18分鐘,水解時間因固定液不同而有差異);

    4.入室溫lmol/LHCl洗;

    5.蒸餾水洗;

    6.人Schiff液,于室溫暗處(或外包黑紙)30~60分鐘;

    7.人亞硫酸鈉水溶液漂洗3次,每次1~2分鐘;

    亞硫酸鈉水溶液配法:

    10%NaHS03 5ml

    1mol/L HCl 5ml

    加蒸餾水至 100ml

    8.蒸餾水洗;

    9.脫水、透明、封固。

    結果:細胞核內DNA染成紫紅色

    對照實驗:

    雖然Feulgen法是DNA 的特異染色方法,但如果延長水解時間并在室溫下進行反應, Schiff試劑也與醛、酮、醇和縮醛磷脂起反應,因此用Feulgen法檢測DNA時必須嚴格控制鹽酸水解的時間和溫度。為減少假陽性和非特異性染色必須做對照實驗。可按上述步驟做平行對照實驗,僅將第3步,即60℃ lmol/LHCl水解改為室溫15分鐘,其余與上述步驟相同,結果DNA應為Feulgen陰性反應。

    推薦方法

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