一、實驗目的

1 明確提取液的配制原理

2 通過對提取液的配制，掌握提取液中各 試劑 在提取中的作用。

二、實驗原理

DNA 是遺傳物質, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基礎。通常要求所提取的DNA 要有理想的純度,足夠完整,無斷裂降解,提取過程盡量少使用有毒化學品等。為了達到上述要求,已報道了不少提取植物DNA 的方法,歸納起來,主要有CTAB 法、SDS法和堿提取法。DNA分子是分子生物學研究的基本材料, 依不同的實驗目的可采取不同的抽提方法獲取數量和質量不等的DNA。因此提取液里 試劑 的配比也有所不同：植物DNA的抽提常采用CTAB方法：

配方如下：

1 配制提取液之前，先配制母液。

母液（滅菌）：5M NaCl ( 58.4g加ddH 2 O制成200ml溶液)

0.5M Na 2 -EDTA(37.22g+ddH 2 O至200ml,用NaOH調pH值為8.0)

1M Tris-HCl(12.11gTris-HCl+ ddH 2 O至100ml,用濃鹽酸調pH值至8.0)

2 提取液配方 100ml 加入：CTAB粉劑 2g 1M Tris(pH8.0) 10ml 0.5M EDTA(pH8.0) 4ml 5M NaCl 28ml PVP 1g β-巰基乙醇 1ml

加雙蒸水定容至100ml

3 抽提液

分別量取苯酚、氯仿、異戊醇按25：24：1的體積比混合，再分別量取氯仿、異戊醇按24：1的體積比混合，配制成兩種抽提液，各配制100ml

4 0.1xTE

1mlTris，20μl EDTA中加H 2 O, 用HCl調pH至8.0, 定溶，滅菌

三、實驗器材

燒杯、量筒、容量瓶、玻璃棒、吸管、移液槍、 離心管 、冰箱、高壓滅菌鍋、電子天平、洗瓶

四、實驗試劑

蒸餾 水、CTAB、NaCl、 EDTA 、 Tris -HCl、β-巰基乙醇、0.1xTE、RNase酶、苯酚、氯仿、異戊醇、無水乙醇