【實驗原理】 蛋白質（或其它含氮有機化合物）與濃H2SO4共熱時，其中碳、氫兩種元素被氧化成CO2和H2O，而氮元素轉變成NH3，并進一步與H2SO4反應生成(NH4)2SO4，殘留于消化液中，該過程通常稱為“消化”。以甘氨酸為例： CH2NH2COOH + 3H2SO4 → 2CO2 + 3SO2 + 4H2O + NH3 2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 但是，該反應進行得很緩慢，消化費時較長，通常需加入K2SO4或Na2SO4以提高反應液的沸點，并加入CuSO4作為催化劑，以加速反應的進行；氧化劑H2O2也能加速反應。消化完畢后，加入過量濃堿（如NaOH）使消化液中的(NH4)2SO4分解放出NH3，以蒸餾法借水蒸汽蒸出的NH3，用一定量、一定濃度的H3BO3溶液吸收。NH3與酸溶液中H+結合成NH4+，使溶液中的H+濃度降低，然后用標準強酸（如鹽酸）滴定，直至恢復溶液中原來的H+濃度為止。 (NH4)2SO4? +? NaOH → Na2SO4 + 2 NH4OH NH4OH? → NH3? + ?H2O 3NH3 + H3BO3 → 3 NH4+ + BO33－ BO33－ + 3H+ → H3BO3 最后根據所用標準酸的量計算出樣品中的含氮量。大多數蛋白質的含氮量平均為16%，所以將測得的蛋白質的含氮量乘以蛋白質系數6.25（即每含氮1g，就表示該物質含蛋白質6.25g），即可計算出蛋白質的含量。 【 器材和 試劑 】 (一）器材 1. 100ml凱氏燒瓶 2. 改進型凱氏定氮儀 3. 50ml容量瓶 4. 分析天平（電子天平）　　 5. 烘箱 6. 電爐 7. 酒精燈 8. 小玻璃珠 9. 滴定管 10. 洗瓶 11. 錐形瓶 12. 鐵架臺 13. 普通面粉或其它樣品 （二） 試劑 1. 消化液 30% H2O2∶濃H2SO4∶H2O 　　　=3∶2∶1 2. 30% NaOH溶液 3. 2% H3BO3溶液 4. 混合催化劑（粉末K2SO4- CuSO4混合物） K2SO4與CuSO4以3∶1比例充分研細混勻。 5. ?0.01mol/L標準鹽酸溶液 6. 混合指示劑（田氏指氏劑） 取0.1%甲烯藍-無水乙醇溶液50ml、0.1%甲基紅-無水乙醇溶液200ml，混合，貯于棕色瓶中備用。該指示劑酸性時為紫紅色，堿性時為綠色，變色范圍很窄（pH5.2～5.6）且很靈敏。 7. 蒸餾 水 【實驗步驟 】 （一） 改進凱氏定氮儀的構造和安裝 改進型凱氏定氮儀由蒸汽發生器、反應室及冷凝器三部分組成。 蒸餾 裝置的結構如圖所示，可分成三部分來敘述： 1. 蒸汽發生器和反應室：蒸汽發生器有3個開口（圖中的3、4、5）；反應室有1個開口(圖中的6)。 2. 冷凝器和通氣室：冷凝器有2個開口（圖中的9、10）；通氣室有2個開口（圖中的12、13）。 3. 排水柱： 排水柱有3個開口（圖中的15、16、17）。 安裝時，按圖的連接方式仔細安裝在一平穩的實驗臺上。先將主體部分固定在鐵架臺上，其底部放上電爐或酒精燈。然后將5與13；4與16；12與15；6與7用橡皮管連接，并夾上自由夾。最后長橡膠管連接進水口10和出水口17。