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    瓊脂糖(Agarose)的特性知多少

    關鍵詞: 瓊脂糖來源: 互聯網

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    學生物的人對瓊脂 、瓊脂糖這兩個詞一定都不會陌生。不過它們是同一樣東西抑或有所差別呢?我想不少人都會犯迷糊了。沒關系,且聽我細細講來。

    首先,瓊脂 和瓊脂糖不光中文叫法有點區別,它們的英文名字也是不同的。先來說說瓊脂,它的英文名為agar。這個詞來源于馬來語的agar-agar,意思是膠狀物。而瓊脂糖的英文名為agarose,天然瓊脂agar由瓊脂糖(agarose)和瓊脂果膠(agaropectin)組成。

    瓊脂 作為一種獨特的食品在我國已經有悠久的歷史。它是從大型海洋藻類石花菜、紫菜、江籬等提取分離制成的,廣泛應用于食品和生化等行業。我們常吃的果凍、冰淇淋、糕點、軟糖、罐頭、八寶粥中都含有瓊脂。我國的山東、福建、廣東、海南等擁有優越的海洋資源和氣候條件,適宜大型海洋藻類的生長,是生產瓊脂的主要地區,產品遠銷世界各地。

    瓊脂 糖是線性的多聚物,基本結構是1,3連結的&beta;-D-半乳呋喃糖和1,4連結的3,6-脫水&alpha;-L-半乳呋喃糖。瓊脂果膠是由許多更小的分子組成的異質混合物。它們的結構相似,但帶硫酸根和羧基組分,凝膠能力差。

    瓊脂 糖在水中一般加熱到90℃以上溶解,溫度下降到35-40℃時形成良好的半固體狀的凝膠,這是它具有多種用途的主要特征和基礎。瓊脂糖凝膠性能通常用凝膠強度表示。強度越高,凝膠性能越好。質量較好的瓊脂糖強度通常在1200克/cm2以上(1%膠濃度)。瓊脂糖的凝膠性是由存在的氫鍵所致,凡是能破壞氫鍵的因素都能導致凝膠性的破壞。

    瓊脂糖具有親水性,并幾乎完全不存在帶電基團,對敏感的生物大分子極少引起變性和吸附,是理想的惰性載體。在瓊脂糖制備過程中需要把瓊脂果膠盡量去除,否則瓊脂糖有可能存在極微量硫酸根和丙酮酸取代電離基團,就會造成電內滲(EEO),電內滲對質點的移動產生影響。質量較好的瓊脂糖硫酸根含量比較低,通常在0.2%以下,電內滲比較小,通常在0.13以下。這也就是瓊脂糖比瓊脂貴那么多的原因了。

    瓊脂糖特性:

    ◆透明度好:溶解快,膠液清澈透明

    ◆高強度:保證凝膠的強度與彈性,即使是低濃度的凝膠也不易發生破碎。

    ◆低電內滲:減少對電泳質遷物遷移與分離的影響。

    ◆極低的背景:沒有其它熒光物質干擾,泳帶與背景黑白分明,拍攝的圖片效果好。

    ◆沒有核酸酶和蛋白酶。

    凝膠制備方法

    1. 配制適量的電泳及制膠用的緩沖液。根據電泳需要,配置合適濃度的電泳及制膠緩沖液。

    注:用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須是相同的。

    2. 根據制膠量及凝膠濃度,在加有一定量的電泳緩沖液的三角錐瓶中,加入準確稱量的瓊脂糖粉(總液體量不宜超過三角錐瓶的50%容量)。

    3. 在微波爐中加熱溶解瓊脂糖

    1)膠液濃度<2%: 設置高火加熱,膠液沸騰約1分鐘直至瓊脂糖膠液清澈,保證瓊脂糖完全溶解。請戴上防熱手套,小心搖動三角錐瓶,使瓊脂糖膠液充分均勻。

    2)膠液濃度>2%:設置中火加熱,膠液開始沸騰后,停止加熱,移開三角錐瓶,小心搖動三角錐瓶,然后再次加熱,膠液沸騰直至膠液清澈,保證瓊脂糖完全溶解。

    注:必須保證瓊脂糖充分完全溶解,否則,會造成電泳圖像模糊不清。加熱時如膠液劇烈沸騰發泡,停止加熱。微波爐中加熱時間不宜過長。

    4. 使溶液冷卻至60℃左右,如需要可在此時加入溴化乙錠(EB)溶液使其終濃度為0.5ug/ml,并充分混勻。

    注:溴化乙錠是一種致癌物質。使用含有溴化乙錠的溶液時,請戴用手套。

    5. 將瓊脂糖溶液倒入制膠模中,然后在適當位置處插上梳子。凝膠厚度一般在3-5 mm 之間。

    6. 在室溫下使膠凝固(大約30 分鐘-1 小時),然后放置于電泳槽中進行電泳。

    注: 凝膠不立即使用時,請用保鮮膜將凝膠包好后在4℃下保存,一般可保存2~5 天。

    1937年,科學家第一次利用瓊脂分離出瓊脂糖,但那之后的24年后,瓊脂糖優異性能才開始被發現并引起大量的關注,并開始大量生產。現在,瓊脂糖已為廣大科研工作者所知,并廣泛應用于生物分子提取、凝膠電泳等領域。

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