一、競爭性RIA，又稱傳統RIA

　　主要特點：標記的是抗原。其原理：未知抗原Ag+標記抗原Ag +已知定量抗體Ab標記抗原與抗體復合物AgAb+未知抗原與抗體復合物Ag Ab+游離標記抗原Ag （去除）（未知抗原多，標記抗原與定量抗體結合的復合物就少，表現為負相關）。

　　臨床上甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），8 一微球蛋白（pz—MG ），鐵蛋白（Fer），人絨毛膜促性腺激素p亞單位（HCG-13）等的檢測都是競爭性RIA法原理。競爭性RIA法，根據加樣順序與溫育次數的區別，反應方式分三種：平衡法，將非標記抗原（被測物與標準品）、抗體、標記抗原依次加入反應管，混勻后一次性溫育至反應達到動態平衡，再加分離劑分離B（復合物）與F（游離物）如：AFP，8 一MG，Fer；順序加樣法，先將非標記抗原（被測物與標準品），與抗體在反應管內作第一次溫育，待反應達到動態平衡后。加入標記抗原，再作第二次溫育后，分離B與F如：CEA；急診檢測法：為臨床急需檢測結果而提出的反應方式，不等RIA 反應達到動態平衡就終止反應；分離劑的選擇有，PEG（聚乙二醇），第二抗體等。

　　現在一般采用的是：第二抗體與PEG合用的方法，稱為雙抗體一PEG法。

　　PEG原理：PEG濃度達到7 一9 時能使抗原一抗體復合物沉淀。

　　優點：經濟，簡便，通用。

　　缺點：重復性差，非特異性結合率高。

　　第二抗體：第一抗體是可與被測抗原進行特異結合的抗體，來自家兔或豚鼠。用第一抗體為抗原，作用到羊，馬身上，產生的抗第一抗體的抗體稱第二抗體。第二抗體與第一抗體在適當條件下發生特異性結合，生成分子量很大的免疫復合物（AgAb ×Ab ），能自然沉淀。

　　優點：分離效果好。非特異性結合率低。

　　缺點：增加經費投入。需要第二次溫育，延長了時間。

　　所以就產生了兩者合用的雙抗體一PEG法，它結合了上述兩種方法的優點。

　　二、非競爭性RIA，又稱免疫放射分析（IRMA）

　　主要特點：標記的是抗體。

　　按反應原理分為兩種：

　　（一）單位點IRMA

　　其原理：抗原只有一個抗原決定簇，所測的抗原為小分子抗原，Ab+AgAg Ab+ Ab+ ImAd—Ag ImAd—AgAb+Ag Ab（去除）（負相關）：（ImAd—Ag）固相抗原免疫吸附劑，一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原；雙位點IRMA：抗原有兩個抗原決定簇，所使用的兩種亞型抗體在與同一抗原分子結合時互不干擾ImAd—Ab+AgImAd—Ab—Ag+ AbImAd-Ab—Ag -Ab+ Ab（過剩的，游離的）：（ImAd—Ab）固相抗體免疫吸附劑，一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗體。

　　（二）雙位點IRMA，又稱雙抗體夾心法

　　從加樣測定順序上看，有三種方法：固相抗體先與未知抗原結合，再與標記抗體結合（正向兩步法）。然后去除游離的標記抗體，測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數；未知抗原先與標記抗體結合，再與同相抗體結合（反向兩步法）。然后去除游離的標記抗體，測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數；未知抗原與固相抗體和標記抗體同時反應（一步法，又稱同時加樣法）。然后去除游離的標記抗體，測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數。

　　這三種方法都生成夾心狀的抗體一抗原一抗體復合物，故又稱雙抗體夾心法。

　　糖類抗原CA50，CA125就用的是其中的第三種方法（一步法），血清中的未知抗原與固相抗體和標記抗體同時反應，生成夾心狀的抗體一抗原一抗體復合物，然后去除游離的標記抗體，測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數。