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  • 介紹生物基本實驗技術、細胞生物學、微生物、植物學、遺傳學等相關實驗操作、儀器使用、試劑、注意事項等等。請大家多多指點,記得給我評論哦!

    分子生物學實驗室常用儀器使用方法與保養

    上一篇 / 下一篇  2008-03-26 13:46:14/ 個人分類:基本實驗技術

    分子生物學操作中會涉及一系列儀器,使用不當導致實驗失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器。因此在進行操作前細致地了解各種儀器的使用方法及注意事項,是使后繼實驗事半功倍的一個必要準備。

    冷凍離心機

    低溫分離技術是分子生物學研究中必不可少的手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中,都離不開低溫離心技術,因此低溫冷凍離心機已成為分子生物學研究中必需的重要工具。

    使用方法:

    1.離心機應放置在水平堅固的地板或平臺上,并力求使機器處于水平位置以免離心時造成機器震動。

    2.打開電源開關,按要求裝上所需的轉頭,將預先以托盤天平平衡好的樣品放置于轉頭樣品架上(離心筒須與樣品同時平衡),關閉機蓋。

    3.按功能選擇鍵,設置各項要求:溫度、速度、時間、加速度及減速度,帶電腦控制的機器還需按儲存鍵,以便記憶輸入的各項信息。

    4.按啟動鍵,離心機將執行上述參數進行運作,到預定時間自動關機。

    5.待離心機完全停止轉動后打開機蓋,取出離心樣品,用柔軟干凈的布擦凈轉頭和機腔內壁,待離心機腔內溫度與室溫平衡后方可蓋上機蓋。

    注意事項:

    1.機體應始終處于水平位置,外接電源系統的電壓要匹配,并要求有良好的接地線。

    2.開機前應檢查轉頭安裝是否牢固,機腔有無異物掉入。

    3.樣品應預先平衡,使用離心筒離心時離心筒與樣品應同時平衡。

    4.揮發性或腐蝕性液體離心時,應使用帶蓋的離心管,并確保液體不外漏,以免腐蝕機腔或造成事故。

    5.擦拭離心機腔時動作要輕,以免損壞機腔內溫度感應器。

    6.每次操作完畢應作好使用情況記錄,并定期對機器各項性能進行檢修。

    7.離心過程中若發現異常現象,應立即關閉電源,報請有關技術人員檢修。

    附:相對離心力與每分鐘轉速的換算

    離心機的轉速,在以前實驗資料中一般以每分鐘多少轉來表示。由于離心力不僅為轉速函數,亦為離心半徑的函數,即轉速相同時,離心半徑越長,產生的離心力越大。因此僅以轉速表達離心力是不夠科學的,近年來主張用相對離心力(RCF)來表示比較合理。現在國際資料中,已改用相對離心力來表示。

    兩者的互換公式如下:

     

    PCR擴增儀:

    目前各公司提供的PCR儀操作方法各有不同,按其操作說明進行操作。

    值得提出的是,在使用一定時期后,樣品孔的實際溫度與儀器顯示溫度有時會有較大差異,應當請廠商的技術支持人員校對儀器的各項性能。

    數字式酸度計:

    一、 準備工作

    1.儀器應平放在符合使用環境的工作臺上,依視覺角度支起支架。

    3.pH值的定位測量法:

    (一)二點定位法(高精度測量方法)

    (1) 連接好電極線路,將參比電極及活化滿24h以上清潔的PH電極移入第一標準緩沖液pH1中(例pH1=4.00),待儀器響應穩定后,調節定位旋鈕至儀器顯示為“0.00”;

    (2) 將電級系統從第1種標準液中取出,用去離子水沖洗干凈后以濾紙吸干電級表面水份,移入第2種標準液(例pH2=9.18)中,儀器響應穩定后,調節斜率旋鈕,使儀器顯示為(△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18)此后斜率旋鈕不可再動,除非更換電極系統;

    (3) 斜率調節完成后,重新調節定位旋鈕,使儀器顯示第2種標準液的實際pH值(9.18),至此2點定位結束;

    (4) 將電極從第2種標準液中取出沖洗、吸干后移入待測溶液中,儀器響應穩定后顯示的數值即為待測溶液的pH值。

    (二)一點定位法(粗略測量法)

    (1) 將溫度補償旋鈕調至溶液溫度值;

    (2) 向左將斜率補償旋鈕旋轉至頭;

    (3) 將電級系統移入標準液中(一點法僅用一種標準液,如pH=4.00時),調節定位旋鈕使儀器顯示“4.00”;

    (4) 取出電級沖洗吸干水分后移至待測溶液中,儀器響應穩定后顯示的數值即為待測溶液的pH值。

    三、溫度的測量

    1.將功能選擇撥至溫度檔。

    2.將溫度探頭插入插孔,并將溫度探頭置于環境條件或溶液中,儀器響應穩定后儀器顯示值即為環境條件或溶液溫度值。

    四、注意事項

    1.認真做好儀器使用前準備工作。

    2.儀器通電后或測量過程中出現顯示不穩或亂跳現象,應切斷電源進行檢查,如電壓、預熱時間及電極系統等是否正常。

    3.使用不同電極應注意排除離子的干擾,選擇好鹽橋,必要時應使用離子強度固定劑。

    4.電極系統從第1種溶液取出移入第2種溶液之前,須用去離子水或雙蒸水清洗干凈,再用濾紙吸干表面水分,以免影響測定結果的準確性。

    5.儀器應存放于干燥、清潔無腐蝕的場所,每次測量結束后應關閉電源,退出電極及溫度探頭妥善保存。玻璃電極清洗后可浸于去離子水待用(注意水面不得低于玻璃球泡),甘汞電極清潔后套上橡皮帽置于配套盒中保存,當甘汞電極內充液泄漏或不飽和及鹽橋中斷時,應及時補充飽和內充液。

    6.該類儀器均采用大規模集成電路,輸入阻值較高,在對儀器內部進行任何零部件修理焊接時,應使用45W以下有良好地線的烙鐵,無接地線烙鐵應撥下電源插頭焊接。

     

    分光光度計

    不同物質對不同波長入射光的吸收程度各不相同,從而形成特征性的吸收光譜。分光光度法不僅適應于可見光區,同時還可擴展至紫外光區及紅外光區,因此給科研實驗帶來了極大方便。下面重點介紹分光光度計的使用及注意事項。

    使用規則

    1.接通穩壓器電源,待穩壓器輸出電壓穩定至200V后打開光度計電源,儀器自動進入初始化。

    2.初始化約需時10 min,內容包括:①尋找零級光;②建立基線;③最后當顯示器指示××nm時,,表明儀器完成初始化程序,可進入檢測狀態。

    3.按要求輸入各項參數,選擇相應比色杯(玻璃或石英),將空白管、標準管及待測管依次放入比色皿架內,關上比色池蓋。

    4.以空白管自動調零。

    5.試樣槽依次移至樣品位置,待數據顯示穩定后按“START/STOP”鍵,打印機自動打印所測數據,重復上述步驟,直到所有樣品檢測完畢。

    6.檢測結束后應及時取出比色杯,并清洗干凈放回原處,同時關上儀器電源開關及穩壓器電源開關,做好使用情況登記。

    注意事項

    1.儀器初次使用或使用較長時間(一般為一年),需檢查波長準確度,以確保檢測結果的可靠性。

    2.由于長途運輸或室內搬運可能造成光源位置偏移,導致亮電流漂移增大。此時對光源位置進行調整,直至達到有關技術指標為止。若經調整校正后波長準確度、暗電源漂移及亮電流漂移三項關鍵指標仍未符合要求,則應停止使用,并及時通知有關技術人員檢修。

    3.每次檢測結束后應檢查比色池內有否溶液溢出,若有溢出應隨時用濾紙吸干,以免引起測量誤差或影響儀器使用壽命。

    4.儀器每次使用完畢,應于燈室內放置數袋硅膠(或其它干燥劑),以免反射鏡受潮霉變或沾污,影響儀器使用,同時蓋好防塵罩。

    5.儀器室應通常保持潔凈干燥,室溫以5-35℃為宜,相對溫度不得超過85%。有條件者應于室內配備空調機及除濕機,以確保儀器性能穩定。

    6.儀器室不得存放酸、堿、揮發性或腐蝕性等物質,以免損壞儀器。

    7.儀器長時間不用時,應定時通電預熱,每周1次,每次30min,以保證儀器處于良好使用狀態。

     

    電泳儀

    電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。而區帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學領域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,根據這一特征,應用電泳法便可以對不同物質進行定性或定量分析,或將一定混合物進行組份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或實驗研究中具有極其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設計制造的。下面簡單介紹其使用方法及注意事項。

    使用方法

    1.首先用導線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯接,注意極性不要接反。

    2.電泳儀電源開關調至關的位置,電壓旋鈕轉到最小,根據工作需要選擇穩壓穩流方式及電壓電流范圍。

    3.接通電源,緩緩旋轉電壓調節鈕直到達到的所需電壓為止,設定電泳終止時間,此時電泳即開始進行。

    4.工作完畢后,應將各旋鈕、開關旋至零位或關閉狀態,并撥出電泳插頭。

    注意事項

    1.電泳儀通電進入工作狀態后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內取放東西,如需要應先斷電,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,以防漏電。

    2.儀器通電后,不要臨時增加或撥除輸出導線插頭,以防短路現象發生,雖然儀器內部附設有保險絲,但短路現象仍有可能導致儀器損壞。

    3.由于不同介質支持物的電阻值不同,電泳時所通過的電流量也不同,其泳動速度及泳至終點所需時間也不同,故不同介質支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。

    4.在總電流不超過儀器額定電流時(最大電流范圍),可以多槽關聯使用,但要注意不能超載,否則容易影響儀器壽命。

    5.某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,允許在穩壓狀態下空載開機,但在穩流狀態下必須先接好負載再開機,否則電壓表指針將大幅度跳動,容易造成不必要的人為機器損壞。

    6.使用過程中發現異常現象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,進行檢修,以免發生意外事故。

     

    分析天平

    分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要儀器,充分了解儀器性能及熟練掌握其使用方法,是獲得可靠分析結果的保證。分析天平的種類很多,有普通分析天平、半自動/全自動加碼電光投影阻尼分析天平及電子分析天平等。下面就電子分析天平的使用方法及注意事項做一介紹。

    操作方法

    1.檢查并調整天平至水平位置。

    2.事先檢查電源電壓是否匹配(必要時配置穩壓器),按儀器要求通電預熱至所需時間。

    3.預熱足夠時間后打開天平開關,天平則自動進行靈敏度及零點調節。待穩定標志顯示后,可進行正式稱量。

    4.稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上,關上側門,輕按一下去皮鍵,天平將自動校對零點,然后逐漸加入待稱物質,直到所需重量為止。

    5.被稱物質的重量是顯示屏左下角出現“→”標志時,顯示屏所顯示的實際數值。

    6.稱量結束應及時除去稱量瓶(紙),關上側門,切斷電源,并做好使用情況登記。

    注意事項

    1.天平應放置在牢固平穩水泥臺或木臺上,室內要求清潔、干燥及較恒定的溫度,同時應避免光線直接照射到天平上。

    2.稱量時應從側門取放物質,讀數時應關閉箱門以免空氣流動引起天平擺動。前門僅在檢修或清除殘留物質時使用。

    3.電子分析天平若長時間不使用,則應定時通電預熱,每周一次,每次預熱2h,以確保儀器始終處于良好使用狀態。

    4.天平箱內應放置吸潮劑(如硅膠),當吸潮劑吸水變色,應立即高溫烘烤更換,以確保吸濕性能。

    5.揮發性、腐蝕性、強酸強堿類物質應盛于帶蓋稱量瓶內稱量,防止腐蝕天平。

    2.通電前應按工作電源要求檢查電壓是否符合要求,若電源波動太大,應經交流穩壓后再送接儀器。

    3.電源應用良好接線,以消除外界干擾,使用攪拌器時,務必使攪拌器外殼與儀器接地端相連。

    4.接通儀器電源,經10min預熱后,可進行測量工作。

    二、pH(酸堿度)測量

    1.將功能選擇撥至“pH”檔,調節定位旋扭,斜率補償旋鈕及溫度補償旋鈕顯示值應有相應變化。

    2.通過儀器溫度檔測定標準液及待測樣品液溫度(要求兩種液體溫度保持一致,以減少測定誤差),并用溫度補償旋鈕調節至溶液實際溫度值。


    TAG: pcr分光光度計分析天平電泳儀離心機

     

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