乳、乳制品及飼料中三聚氰胺的色譜測定

上一篇 / 下一篇 2010-05-06 10:14:36

　　1.三聚氰胺理化性質

　　三聚氰胺：英文名“melamine”，簡稱三胺，學名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3;分子量：126.12;物理性能：白色結晶粉末，無毒，無味;相對密度：1570kg/m3;熔點：在常壓下，354℃分解;升華溫度：300℃;溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶;微溶于水、乙醇;不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱堿性。

　　化學性能：三聚氰胺是一種重要的氮雜環有機化工原料，顯弱堿性，能夠與各種酸反應生成三聚氰胺鹽;在強酸或強堿液中，三聚氰胺發生水解，胺基逐步被羥基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸;三聚氰胺與醛類反應生成加成化合物;三聚氰胺與甲醛反應制成樹脂，三聚氰胺樹脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩定性，用于生產塑料、地板磚，廚房用具，防火纖維，商業濾膜，膠水和阻燃劑。

　　2. 乳制品

　　是指以生鮮牛(羊)乳及其制品為主要原料，經加工而制成的各種食品。本標準所指的乳制品包括液體乳類(殺菌乳、滅菌乳、酸牛乳、配方乳)、乳粉類(全脂乳粉、脫脂乳粉、全脂加糖乳粉和調味乳粉、嬰幼兒乳粉、其他配方乳粉)、含乳飲料類、煉乳類(全脂無糖煉乳、全脂加糖煉乳、調味煉乳;配方煉乳)、乳脂肪類(稀奶油、奶油、無水奶油)、干酪類(原干酪;再制干酪)、乳冰淇淋類(乳冰淇淋、乳冰)和其他乳制品類(干酪素、乳糖、乳清粉、濃縮乳清蛋白)等。

　　二.高效液相色譜法測定

　　1. 原理

　　試樣經溶解、超聲提取、沉淀蛋白、過濾得到測試液，經高效液相色譜測定，根據保留時間和紫外吸收光譜定性，根據峰面積進行定量。

　　2 試劑

　　方法中所用試劑，除另有規定外，均為分析純試劑，水為GB/T 6682-2008中一級用水，溶液為水溶液。

　　2.1 磺基水楊酸。

　　2.2 檸檬酸。

　　2.3 辛烷磺酸鈉：高效液相色譜離子對試劑。

　　2.4 乙腈：色譜純。

　　2.5 鹽酸。

　　2.6 60 g/L磺基水楊酸：稱取60 g磺基水楊酸用水定容至1 L。

　　2.7 0.1 mol/L鹽酸：量取8.3 mL鹽酸用水稀釋至1 L。

　　2.8 緩沖液：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L。

　　2.9 三聚氰胺標準品：已知含量大于99%。

　　2.10 標準儲備液：稱取三聚氰胺標準品0.01g(準確至0.0 001g)，用甲醇配制成濃度為1mg/mL標準儲備液。

　　2.11 標準系列：將標準儲備液用0.1 mol/L鹽酸逐級稀釋至0.25μg/mL，0.50μg/mL，1.00 μg/mL，2.00 μg/mL，4.00 μg/mL，5.00 μg/mL，10.0 μg/mL的系列標準溶液。

　　3 儀器成套性

　　3.1 高效液相色譜儀

　　3.1.1 P3000型高壓輸液泵

　　3.1.2 UV3000紫外檢測器

　　3.1.3 Rehodyne手動進樣閥 (20μl)

　　3.1.4 CXTH3000色譜工作軟件

　　3.1.5 ODS(VenusilASB-C18色譜柱) 250 mm×4.6 mm，5 μm

　　3.1.6 分析啟動工具包

　　3.1.7 溶劑托盤

　　3.1.8 試劑包

　　3.1.9 保護柱和柱芯

　　3.1.10真空固相萃取裝置(含混合型的陽離子交換柱10根)

　　3.2 溶劑過濾器(含真空泵)

　　3.3 超聲波清洗器

　　3.4 柱溫箱

　　3.5 高速離心機：轉速>4 000 r/min

　　3.6 旋渦混勻器

　　3.7 分析天平：感量0.1mg

　　4 樣品處理

　　4.1 固態乳制品

　　稱取1.0 g左右試樣(準確至0.0 001 g)，加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經0.45 μm的微孔濾膜過濾后進樣。

　　4.2 液態乳制品(包含酸奶)

　　稱取15 g左右試樣(準確至0.0 001 g)，加入60 g/L磺基水楊酸3 mL~4 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經0.45 μm的微孔濾膜過濾后進樣。

　　4.3 飼料

　　稱取1.0g左右試樣(準確至0.0 001 g)，將樣品用研缽充分碾碎混勻，加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經0.45 μm的微孔濾膜過濾后進樣。

　　5 測定步驟

　　5.1 色譜條件

　　5.1.1 色譜柱：ODS或C8，250 mm×4.6 mm，5 μm。

　　5.1.2 流動相：緩沖液︰乙腈=85︰15。

　　5.1.3 流速：1.0 mL/min。

　　5.1.4 柱溫：40 ℃。

　　5.1.5 波長：240 nm。

　　上述色譜條件是典型的，可根據實際情況做具體調整。如果分離效果不理想，將水相改為：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L，加3mL三氯乙酸，配制成1000mL溶液，流動相用氨水調PH值3.9到3.95。

　　5.2 測定

　　5.2.1 標準曲線制備

　　將標準系列0.25μg/mL，0.50μg/mL，1.00 μg/mL，2.00 μg/mL，4.00 μg/mL，5.00 μg/mL，10.0 μg/mL分別進樣20 μL,以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標作圖，制作標準曲線。

　　5.2.2 樣品測定