液相色譜系統的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設備參數得到解決;而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。
A、 峰拖尾
原 因
解決方法
1、篩板阻塞
1、a、反沖色譜柱
b、更換進口篩板
c、更換色譜柱
2、色譜柱塌陷
2、填充色譜柱
3、干擾峰
3、a、使用更長的色譜柱
b、改變流動相或更換色譜柱
4、流動相PH選擇錯誤
4、調整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰
5、樣品與填料表面的溶化點發生反應
圖
5、a、加入離子對試劑或堿性揮發性修飾劑
b、更改色譜柱
B、 峰前延
原 因
解決方法
1、柱溫低
1、升高柱溫
2、樣品溶劑選擇不恰當
2、使用流動相作為樣品溶劑
3、樣品過載
3、降低樣品含量
4、色譜柱損壞
4、見A1、A2
C、 峰分叉
原 因
解決方法
1、 保護柱或分析柱污染
圖
1、取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質污染，運用適當的再生措施。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。
2、樣品溶劑不溶于流動相
2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
D、 峰變形
原 因
解決方法
1、樣品過載
1、減少樣品載量
E、 早出的峰變形
原 因
解決方法
1、樣品溶劑選擇不恰當
1、a、減少進樣體積
b、運用低極性樣品溶劑
F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原 因
解決方法
1、柱外效應
1、a、調整系統連接(使用更短、內徑更小的管路)
b、使用小體積的流通池
G、 K’增加時，脫尾更嚴重
原 因
解決方法
1、二級保留效應，反相模式
1、a、加入三乙胺(或堿性樣品)
b、加入乙酸(或酸性樣品)
c、加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品)
d、更換一支柱子
2、二級保留效應，正相模式
2、a、加入三乙胺(或堿性樣品)
b、加入乙酸(或酸性樣品)
c、加入水(或多官能團化合物)
d、試用另一種方法
3、二級保留效應，離子對
3、加入三乙胺(或堿性樣品)
H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾
原 因
解決方法
1、緩沖不合適
1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液
b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液
I、 額外的峰
原 因
解決方法
1、樣品中有其他組份
1、正常
2、前一次進樣的洗脫峰
2、a、增加運行時間或梯度斜率
b、提高流速
3、空位或鬼峰
3、a、檢查流動相是否純凈
b、使用流動相作為樣品溶劑
c、減少進樣體積
J、 保留時間波動
原 因
解決方法
1、溫控不當
1、調好柱溫
2、流動相組分變化
2、防止變化(蒸發、反應等)
3、色譜柱沒有平衡
3、在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱
K、 保留時間不斷變化
原 因
解決方法
1、流速變化
1、重新設定流速
2、泵中有氣泡
2、從泵中除去氣泡
3、流動相選擇不恰當
3、a、更換合適的流動相
b、選擇合適的混合流動相
L、 基線漂移
原 因
解決方法
1、柱溫波動。(即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。)
1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
圖
2、流動相不均勻。(流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。)
2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體
3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)
4、檢測器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線)
4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動相配比不當或流速變化
5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
6、柱平衡慢，特別是流動相發生變化時
6、用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。
7、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成
7、檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑
8、樣品中有強保留的物質(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。
8、使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
9、使用循環溶劑，但檢測器未調整。
9、重新設定基線。當檢測器動力學范圍發生變化時，使用新的流動相。
10、檢測器沒有設定在最大吸收波長處。
10、將波長調整至最大吸收波長處
M、 基線噪音(規則的)
原 因
解決方法
1、在流動相、檢測器或泵中有空氣
1、流動相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液
圖
2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動相混合不完全
3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑
4、溫度影響(柱溫過高，檢測器未加熱)
4、減少差異或加上熱交換器
5、在同一條線上有其他電子設備
5、斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。
6、泵振動
6、在系統中加入脈沖阻尼器
N、 基線噪音(不規則的)
原 因
解決方法
1、 漏液
圖
1、見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。
2、流動相污染、變質或由低質溶劑配成
2、檢查流動相的組成。
3、流動相各溶劑不相溶
3、選擇互溶的流動相
4、檢測器/記錄儀電子元件的問題
4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。
5、系統內有氣泡
5、用強極性溶液清洗系統
6、檢測器內有氣泡
6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調節器
7、流通池污染(即使是極少的污染物也會產生噪音。)
7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池
8、檢測器燈能量不足
8、更換燈
9、色譜柱填料流失或阻塞
9、更換色譜柱
10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常
10、維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置
O、 寬峰
原 因
解決方法
1、流動相組成變化
1、重新制備新的流動相
2、流動相流速太低
2、調節流速
3、漏液(特別是在柱子和檢測器之間)
3、見section
3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。
4、檢測器設定不正確
4、調整設定
5、柱外效應影響
a、柱子過載
b、檢測器對反應時間或池體積響應過大
c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大
d、記錄儀響應時間太長
圖
5、
a、 小體積進樣(例如：10ul而不是100ul)以1：10或1：100的比例稀釋樣品
b、減少響應時間或使用更小的流通池
c、 使用內徑為0.007-0.01的短管路
d、減少響應時間
6、緩沖液濃度太低
6、增加濃度
7、保護柱污染或失效
7、更換保護柱
8、色譜柱污染或失效，塔板數較低
8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
9、柱入口塌陷
9、打開柱入口，填補塌陷或更換柱子
10、呈現兩個或多個未被完全分離的物質的峰
10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果
11、柱溫過低
11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75℃
12、檢測器時間常數太大
12、使用較小的時間常數
P、 分離度降低
原 因
解決方法
1、流動相污染或變質(引起保留時間變化)
1、重新配置流動相
2、保護柱或分析柱阻塞
圖
2、去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當的再生程序。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
Q、 所有的峰面積都太小
原 因
解決方法
1、檢測器衰減設定過高
1、減少衰減的設定
2、檢測器時間常數設定太大
2、設定較小的時間常數
3、進樣量太少
3、增大進樣量
4、記錄儀連接不當
4、使用正確的連接
R、 所有的峰面積都太大
原 因
解決方法
1、檢測器衰減設定過低
1、采取較大的衰減
2、進樣過多
2、減少進樣量
3、記錄儀連接不正確
3、正確連接記錄儀
