中藥新藥質量標準研究中常見問題淺析

上一篇 / 下一篇 2007-12-25 08:23:54/ 個人分類：藥物分析

摘自：《中成藥》文/周躍華(國家食品藥品監督管理局藥品審評中心，北京100038)

安全、有效、質量可控是藥品的基本屬性。安全是前提，有效是目的，質量可控是保證。藥品質量的可控性是藥品的基本屬性之一，是藥品的安全性和有效性的基礎。質量標準是監控藥品質量的重要手段，是質量可控性的具體體現。近年來，中藥新藥質量標準的研究，在不斷規范的同時呈現出一種程式化的趨勢，存在一些共性問題，本文試圖就中藥新藥質量標準研究中的有關問題進行初步的分析，文中多屬個人觀點，拋磚引玉，共同探討。

1 中藥新藥質量標準研究中的常見問題分布狀況為了解近年來申請注冊的中藥新藥質量標準研究中的常見問題，我們對2001～2002年申請號連續的200個申請臨床研究的中藥新藥品種進行了分析，對補充通知中與質量標準相關的內容進行了統計歸類。由于申報臨床研究的新藥本身具有不確定性，故統計的數據只能代表所統計時間段內的情況。在統計的200個申報的新藥品種中，直接因藥學問題不批準或退審的品種有7個，占3．5％；藥學方面符合新藥臨床前研究要求，直接建議批準臨床研究的品種有28個，占14％；藥學內容需補充資料的品種165個，占82．5％，其中需補充質量標準研究資料的品種156個，占78％。從上表可見，中藥新藥質量標準研究中，確有一些值得關注的共性問題，如重金屬砷鹽問題、處方藥味鑒別、含測方法學研究、含測限度等。表中同一個品種的質量標準部分可能同時存在幾個問題。

2對于中藥新藥質量標準中幾個問題的認識

2．1 關于鑒別

處方藥味的鑒別是質量標準的重要內容。鑒別方法包括顯微鑒別、理化鑒別、光譜鑒別、色譜鑒別等，要求專屬性強、靈敏度高、重現性較好。

鑒別藥昧的選擇：可根據處方組成及研究資料確定相應的鑒別項目，原則上處方中各藥味均應進行鑒別研究。當中藥處方中藥昧較多時，可優先鑒別處方中的君臣藥、貴重藥、毒性藥。一般情況下，藥味中所含特征性成分建立了含測方法，可以不必進行鑒別，若測定的成分廣泛存在于較多藥材中，該藥材的鑒別仍有意義。鑒別藥味少、未對貴重藥材及毒性藥材進行鑒別是常見的問題。

鑒別方法的研究：隨著各種高效薄層板、自動點樣等儀器的日益普及，使得薄層鑒別的分離度及重現性提高，薄層鑒別方法已成為中藥質量標準中最重要的質控方法之一。薄層鑒別需選擇適宜的對照物對照。當處方中有一味以上藥材同時含有待鑒別成分時，應增加對照藥材對照，以提高專屬性。如人參與三七、黃連與黃柏等。對于處方中的貴重藥材也需注意鑒別方法的專屬性，如對天然牛黃與人工牛黃等應注意區分，天然牛黃不含有豬去氧膽酸，而人工牛黃中含有，可利用該特征將二者區分開。此外，多基源的中藥材的薄層行為不同時，可采用對照品對照，如秦艽有4個來源均含有龍膽苦苷，應采用龍膽苦苷對照品作為對照，而不宜采用秦艽藥材作對照，相似的品種還有甘草、遠志等。薄層鑒別方法常見的問題有：專屬性差、未提供薄層照片、陰性樣品有干擾或陰性樣品點樣量過少等。

分組鑒別法：對于處方藥味較多的中藥復方制劑而言，要鑒別其中的每一藥味常比較困難，干擾多，工作量大，且不能充分利用每一種色譜條件下表現出的豐富信息。可采用“分組鑒別法”，即按處方藥味所含成分的類別進行分組，“合并同類項“，針對某類成分的特點進行樣品的前處理、選擇薄層色譜條件。可采用不同的提取溶媒、不同的前處理方法、不同展開系統、不同的薄層板及不同顯色劑或檢測條什等，制備多張圖譜進行鑒別，以達到充分利用色譜信息，提高鑒別效率，體現復方整體特征的目的。如處方中有多個藥材含有生物堿時，可利用生物堿的特點，進行樣品的提取分離、展開、顯色，在一張圖譜上同時鑒別多昧藥材，并體現出該條件下復方的特征。采用分組鑒別法，利用多張薄層圖譜，可鑒別處方中大部分藥味，能從多個側面反應復方的整體特征。進行分組鑒別法的方法學研究時，需要進行對比研究，找出色譜行為特征與處方藥味的對應關系。對照物可采用對照提取物(按復方的處方定量的取對照藥材，在嚴格控制復方工藝的條件下制備，并低溫貯存)作對照進行鑒別，在一定程度上可反映復方的整體面貌。此外，對照提取物對照可模擬復方藥味成分在制備過程中的相互作用，使對照提取物的色譜行為盡可能與制劑樣品一致，起到“指紋”鑒別作用。對照物也可采用幾種對照品的混合物，或幾種對照藥材的混合物，也還可以采用一組已知化合物作對照，類似于基因或蛋白研究中的marker，通過對樣品色譜中各斑點與已知物或對照品斑點相對位置關系的描述，體現樣品的特征。

2．2關于含量測定

含測方法是中藥質量標準中的關鍵內容之一。對于有效成分及有效部位新藥而言，可在很大程度上控制藥品質量。對于復方制劑而言，盡管測定的成分僅占制劑的很小部分，但只要指標選擇恰當，也是質量控制的重要手段。

含測指標的選擇：應根據新藥的功能主治及所含成分選擇合適的含測指標，盡量體現含測指標與藥物安全性、有效性的關聯。中藥新藥質量標準研究中，含測指標選擇不當也是常見問題之一。如以丹參為主藥治療心血管疾病的復方，測定丹參酚酸比測定丹參酮更能反應藥物的質量。如某中藥復方以五倍子為君藥，用于痔瘡的治療。考慮到結合狀態的鞣質可與蛋白質作用產生收斂作用產生收斂的效果，其質控指標可選擇水解后的總沒食子酸量與未水解時游離沒食子酸量之差，以間接反映結合狀態鞣質的含量，比采用水解后總沒食子酸量為測指標更能反映產品的有效性。目前，中藥新藥質量標準中，許多適應癥完全不同的新藥卻采用相同的含測指標，如芍藥苷、黃芪甲苷、大黃素、綠原酸等，難以真正反應中成藥的質量。新藥的質量需要通過真正反應其安全性及有效性的成分表現出來。質量控制一旦脫離了中藥的安全性及有效性，就會偏離方向。

中藥復方制劑含測指標選擇需考慮的因素：

(1)需考慮含測指標與新藥的安全性、有效性的關系。首選新藥的有效成分及毒性成分為含測指標。如含有罌粟殼的止咳藥中藥，應測定嗎啡的含量，并確定合理的含量限度范圍。

(2)需考慮含測指標成分的理化性質。當新藥中所含有效成分或毒性成分，因缺乏標準品、或因其他成分的干擾而確實難以建立含測方法時，可考慮選擇與有效成分化學結構相似、理化性質相近的指標成分，或大類成份為含測指標，以間接反映新藥的有效性或安全性。

(3)需考慮新藥穩定性研究的需要。穩定性研究需要反映新藥穩定性的靈敏指標。如含有苷類成分的新藥，如采用水解后苷元的含量為含測指標則難以反映在貯存期問苷類成分水解成苷元的情況。新藥中有幾個有效成分都可測定含量時，需選擇穩定性較差的成分，以反映藥物的穩定性。

(4)傳統中藥需考慮中醫理論的指導作用。傳統中藥復方制劑為，以中醫理論為指導，采用傳統工藝制成、以傳統功能主治表述的中藥復方制劑。其含測指標應考慮君臣佐使的配伍理論，首選君藥的成分為含測指標。

(5)需考慮含測指標成分與工藝的關系。如含何首烏的復方，以其水提工藝制成的制劑中大黃素的含量很低，而用四羥基二苯乙烯苷為含測指標較好。

(6)需考慮中藥多成分多靶點的特點。處方中含有多個明確有效成分的，或者處方中藥味分別按不同路線提取的，建議研究建立多個含測指標；鼓勵將有效成分、大類成分、浸出物等指標結合起來，以更全面控制產品質量。

(7)中藥含量測定指標的選擇需要考慮與基礎研究的關聯，體現基礎研究與應用研究的關系。應充分利用已有的基礎研究成果，為新藥的研究和評價提供參考；同時，應結合新藥應用研究的需要進行必要的基礎研究，以提高中藥質量控制的水平。已有的研究成果、文獻資料是藥品質量控制研究的基礎，應加以充分利用，體現研究的繼承性。如板藍根一直缺少合適的含測指標，現發現其所含喹唑酮成分具有抗病毒活性，且溶于水及乙醇，含量穩定，有代表性，適用于作為板藍根的質控指標。

(8)其他。含量限度過低者(如低于萬分之一)，應增加含量測定指標或浸出物測定。在建立化學成分的含量測定有困難時，也可考慮建立生物測定等其它方法。中西藥合用的復方制劑，需建立中藥及每個化學藥的含測方法。

含測方法的選擇：含測方法既要體現分析方法的進步，同時也需要兼顧我國大多數申報單位及藥檢部門的實際情況。含量測定方法的建立可在參考有關質量標準及文獻資料的基礎上進行。如黃芩苷已有較成熟的HPLC含測方法就不必采用分光光度法；LC-MS盡管為較好的含測方法，但由于儀器的普及程度等原因，目前尚難以列入標準中。中藥所含成分較復雜，常用的含測方法有HPLC、GC、TLCs等。采用薄層掃描法測定含量時，建議明確掃描積分的參數設置 (靈敏度、線性漂移等)，并對測定條件進行標準化(應采用預制板等)，待測斑點的掃描圖譜應與對照品一致。

含測方法學研究：含測方法學研究是質量標準研究的重要內容。常見的問題有：樣品測定的濃度超出線性范圍、方法學研究項目考察不全、陰性干擾、檢測條件選擇依據不足、自檢結果與省所復核數據差距大等。有的品種樣品經前處理后，實際加樣回收率低，應說明實際情況。

樣品前處理方法是中藥制劑質量標準研究的重要內容。中藥成分復雜，不經過處理難以滿足現代儀器分析對樣品的要求。通過前處理，可達到排除制劑輔料及部分共存雜質的干擾、提高分離度、富集樣品、縮短分析時間、保護儀器包括分析柱等目的。從定量分析觀點看，前處理還需要兼顧回收率問題。采用超聲提取時，需明確所用儀器的功率，并注意樣品放置的位置。

分析方法有其自身的規律。無論分析對象是化學藥、還是中藥，對于分析方法的科學性、規范性的要求是相同的。原則上，可參照藥典二部“藥品質量標準分析方法驗證”進行研究，尤其是對于有效成分及有效部位新藥。具體范圍或限度的確定可根據中藥樣品的具體情況進行調整。中藥復方制劑所含成分復雜，分析難度大。實際工作中，常常可見到省所復核的數據與白檢同批樣品的數據相差較大的情況。有的品種在研究時用新的色譜柱分離度符合要求，一段時間以后分離度就難以符合要求了。對照品溶液的穩定性是常被忽略的內容，中藥的化學對照品配成溶液后常常不夠穩定，但由于其價格的原因使用時間較長，需要考察對照品溶液的濃度隨時間變化的情況，確定對照品溶液的使用期限。對于單一成分的HPLC含測，可在待測成分色譜峰的頂部及底部取3個點，比較其紫外掃描曲線。準確度、精密度、重現性、線性等都是重要的研究內容。

有效部位新藥的大類成分含測是質量標準研究中的難點之一。分光光度法檢測的專屬性較差，需特別注意對含測方法的專屬性進行考察。加強樣品的前處理，避免雜質的干擾是常用的方法。如總黃酮的含測可采用聚酸胺吸附排除部分煩擾，總皂苷的含測可采用大孔吸附樹脂吸附法。分光光度法的含測結果常常難以真實反應有效部位新藥中有關成分的含量，有時大類成分的含量大于50％，但單一成分的含量僅1％左右，此種情況下，需要作進一步研究，如根據所含成分的性質加強樣品的前處理，利用LC-MS等技術，研究同類成分的種類及含量等。對于有效部位中已知成分多，且含量較高的品種，“混合對照品法”是一種較好的選擇。該方法的原理是，選定某一批次的有效部位提取物為“混合對照品“，用分離得到的已知成分單體為對照，對“混合對照品”進行標定，以后，采用該“混合對照品”為對照品對生產的產品進行含量測定，這樣可節省大量的對照品。當然，第一批“混合對照品“用完后還需要若干對照品單體對下一批“混合對照品“進行標定。

含測限度的確定：一般情況下，有效成分或有效部位新藥建議以有效成分或有效成分總量的標示量投料，并規定制劑的含量范圍，如為標示量的90％～110％。中藥復方制劑的含量限度僅以低限表示有其缺陷，最好能夠以含量范圍表示，尤其對于含毒性成分、生物活性較強成分的應制訂合理的含量限度范圍。對于處方劑量固定的中藥復方而言，由于中藥材的含量變化較大有時難以確定較小的范圍，可以根據藥材含量的實際波動情況制訂較寬的含量范圍。以避免可能因藥材含量波動過大而帶來安全性問題。控制投料藥材的含量范圍，采用藥材混批投料等方法，可有利于保證不同批次藥物的質量相對穩定。在確定含量限度時，需考慮藥材、大生產條件等實際情況。

2．3關于重金屬及砷鹽檢查

重金屬及砷鹽是中藥新藥質量標準研究中經常被忽略的內容。砷鹽檢查中需注意進行有機破壞，干法消解時，需酌加穩定劑，鼓勵進行方法學考察，避免高溫下砷的揮法。一般情況下，中藥新藥制劑中重金屬小于10mg·g-1，砷鹽小于2mg·g-1時，有關檢查可不列入質量標準。超過該限度需查找原因，并將相關檢查項列入質量標準。但也有一些特殊情況，如治療白血病的中藥復方制劑，其含砷量較高是合理的，因為砷鹽是治療白血病的有效成分，可在質量標準中建立砷鹽的含測方法，規定含量范圍，同時在說明書中明確有關注意事項。

對于重金屬及砷鹽的限度要求，以濃度作為限度單位有其局限性。一般情況下重金屬及砷鹽引起的小良反應與進入人體的總量有關。如日用劑量為1．0g(O．25g·粒-1×4次／日)的膠囊劑，在含砷鹽為2mg·g-1時，因藥物攝入的砷鹽量為2μg·日-1 ，而日用劑量為500mL的大輸液，在含砷鹽量為2mg·g-1時，因藥物而攝入的砷鹽總量為1000μg·日-1 ，盡管以上膠囊與大輸液所含的砷鹽濃度相同，但二者所含砷鹽的絕對量相差500倍!若規定日服藥物中重金屬及砷鹽的最高劑量，可更準確反應藥品的安全性。

各種金屬離子的毒性不一，測定總的重金屬量不一定能很好反應其安全性。建議采用原子吸收光譜法分別測定鉛、鎘、汞、銅等單一重金屬的量可更準確地反應藥物中重金屬的實際情況。“藥用植物及制劑進出口綠色行業標準”以及食品、飲用水標準中有關金屬離子的限量檢查方法及限量標準可供參考。

2．4關于注射劑的檢查項

注射劑的檢查項較多，包括：蛋白質、鞣質、草酸鹽、鉀離子、樹脂、熾灼殘渣、總固體量測定、不溶性微粒、指紋圖譜等。指紋圖譜：目前中藥注射劑指紋圖譜研究，可參照國家藥典會頒布的“中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗研究技術指南 (試行)”進行。藥材、工藝、包裝及儲存等都可能影響藥品的指紋圖譜。目前指紋圖譜的檢測及評價方法仍在進一步研究中，其中問題之一是，在不同檢測條件下，指紋圖譜的重現性較差。采用“標準提取物”(人為指定的具代表性的樣品)對照的方式，可抵消色譜柱、流動相等系統誤差，改善指紋圖譜的重現性，即只要樣品與“標準提取物”的色譜行為一致即可。此方法的最大困難在于如何保證不同批次“標準提取物”之間的相對穩定，可考慮以指紋圖譜中可定量測定的成分為參照，對不同批次“標準提取物”進行不同色譜峰所代表成分的量的對比，經校正后使用；此外，可建立嚴格的“標準提取物”質量標準，規定不同批次的“標準提取物”在標準的色譜條件下的色譜行為。在一定條件下，可嘗試采用此方法。其他檢查：糅質、蛋白質、草酸鹽、鉀離子、樹脂等檢查對于小容量的注射劑和大容量的注射劑而言，在方法上也可考慮有所區分，如鞣質檢查作為一定性檢查方法，有其最低檢出限。對于含等量藥物的5mL的注射劑和500mL的輸液同時進行該檢查時，若取樣量都是2mL，因二者濃度相差100倍，則有可能當小容量注射劑檢查陽性時，含相同量鞣質但濃度小100倍的大容量注射劑的檢查可能為陰性。建議研究合適的樣品處理方法，減小誤差。小容量注射劑的微粒檢查也是需要關注的問題。

2．5關于溶出度

溶出度檢查主要用于難溶性或難吸收藥物的口服固體制劑，以及治療量與中毒量接近、或用于治療嚴重疾病和急救的固體口服制劑。固體制劑在胃腸道有一個溶出和吸收的過程，一定條件下，溶出度可模擬口服固體制劑在胃腸道崩解和溶出。此外，溶出度也是考察不同批次產品質量一致性的指標。目前有效成分、有效部位中藥新藥的固體口服制劑可參照藥典(二部)方法進行溶出度檢查。

設計溶出度測定方法時，要注意介質脫氣、溫度控制、取樣位置固定、濾過中的吸附等，這些都會影響檢測結果。溶出介質可首選水，還可選擇人工胃液、人工腸液、緩沖液 (pH3～8)等，介質中一般避免加入有機溶劑，可添加適量表面活性劑如十二烷基硫酸鈉(0．5％以下)等。當藥物確實不易溶解時，可視具體情況加入盡可能少的異丙醇、乙醇等，并提供相關文獻資料。溶出曲線一般取5～7個時間點分別取樣測定，定點取樣時間點盡量在拐點處，溶出曲線研究要注意全溶出問題。一般規定30min或45min，溶出大于75％～ 80％。此外，需要考察輔料、膠囊殼及濾材對測定結果有無干擾以及克服干擾的方法，末端吸收的藥物需特別注意。

2．6 其他

性狀項描述。由于中藥制劑性狀的影響因素較多，如藥材產地、采收季節、炮制方法、濃縮干燥的溫度時間、制粒方式等，僅按實驗室樣品進行性狀描述，有可能使得大生產時的樣品性狀不符合要求。

生物學方法也是一種較好的質控方法，適合于有效成分不明而生物活性明確的中藥制劑，某種程度上相當于將體外的藥效試驗作為質量控制的手段。其優點在于，生物學檢查結果可在一定程度上反應中藥某一方面的藥效作用。如某含地龍凍干粉的膠囊，可進行蚓激酶的纖溶活性檢查。某進口植物藥將藥物對白血病細胞的細胞毒作用列入了質量標準。黃體生成素、卵泡刺激素、縮宮素生物檢定法都可嘗試用于具有相應作用的中藥。基于中藥對細胞、細胞因子、基因、蛋白(酶)影響的體外試驗，也是可以嘗試的方法。生物學方法的要求較高，需要靈敏度高、重現性好，還要排除復雜中藥成分的干擾。

3結語

中藥具有成分復雜，有效成分不明確等特點，其質量標準的研究是隨著基礎研究的深入而不斷完善的過程，需要根據新藥的具體情況進行研究，使質量標準能夠反應中藥新藥的安全性及有效性，并能反應不同批次產品質量的相對穩定。