GC法測定腫痛氣霧劑中的薄荷腦含量

摘要：目的：建立腫痛氣霧劑中有效成分薄荷腦含量的氣相色譜測定法。方法：色譜條件為1909IJ-413HP-5石 英毛細管色譜柱，程序升溫，柱溫60℃，保持5min，以每分鐘5℃的升溫速率升至100℃，保持2min，分流比為25：1，FID檢測器，內標物為 萘。結果：薄荷腦濃度在0.01mg/ml～mg/ml范圍內呈線性關系（r=0.9998），加樣平均回收率為101.70%。RSD為2.08% （n=5）。結論：該方法前處理簡單、靈敏度高、線性范圍寬、分離效果好，結果準確可靠。

關鍵詞：腫痛氣霧劑；薄荷腦；氣相色譜法

      新藥腫痛氣霧劑由七葉蓮、三七、雪上一枝蒿、薄荷腦等組成，對跌打損傷、肩周炎、痛風、風濕關節痛及乳腺小葉增生等疾病有顯著療效。試行標準中，采用GC法測定薄荷腦的含量，前處理方法復雜，時間長等。本文進行了薄荷腦含量測定方法的再研究，結果如下。

1、 儀器與試藥
      美國Agilent公司6890氣相色譜儀系統，包括氫火焰離子化檢測器；7683全自動進樣器；色譜柱：1909IJ-413HP-5石英毛細管柱。薄 荷腦對照品(批號0728-200005)， 由中國藥品生物制品檢定所提供;腫痛氣霧劑(批號20040126)，由云南省藥物研究所制藥廠提供；所用試藥、試劑均為分析純。

2、 方法與結果
    2.1 色譜條件 選擇進樣口溫度為250℃，檢測器溫度為250℃，分流比25:1，柱溫60℃，保持5min，以每分鐘5℃升溫速率升至100℃，保持2min作為測定薄荷腦的系統條件。
    2.2 系統適用性實驗 按2.1中的色譜條件，分別取對照品溶液、內標物萘溶液、供試品溶液按1μl進樣分析。被測組分分離效果較好，薄荷腦達記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線。>基線分離，理論板數按薄荷腦峰計算大于120000。
    2.3 線性關系考察 精密稱取薄荷腦對照品57.07mg，用無水乙醇定容于10ml容量瓶中.精密稱取萘內標物513.55mg，用無水乙醇定容于50ml容量瓶中。精密量 取上述對照品溶液0.2ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、2.0 ml，并分別精密加入上述萘溶液1ml，置于10ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度;吸取1.0μl注入氣相色譜儀進行測定，每個濃度進 樣1次。以薄荷腦記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線。>基線構成之面積稱峰面積>峰面積為縱坐標，薄荷腦濃度(mg/ml)為 橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程(n=6)為：Y=809.00X-1.02.r=0.9998.Y-記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為 基線。>基線構成之面積稱峰面積>峰面積,X樣品濃度(mg/ml)。
      以上結果表明，在該條件下，薄荷腦濃度在0.10～1.30mg/ml范圍內有良好的線性關系。
    2.4 精密度實驗 取同一濃度的供試品溶液1.0μl，重復進樣8次，以內標法計算，RSD為0.12%，結果表明此方法的精密度較好。
    2.5 重復性實驗 取同一批號的供試品2.5g6份，分別加入濃度為10.27mg/ml的內標物萘1ml，按含量測定方法分別進行供試品溶液制備、測定，以內標法計算，RSD為0.49%，結果表明此方法的重復性較好。
    2.6 穩定性實驗 取同一種濃度的供試品溶液，分別于室溫0,1,2,3,6,12,24h后進樣，7次測定得到的平均值為0.55mg/ml，RSD為0.49%。結果表明在24h內，供試品溶液有較好的穩定性。
    2.7 回收率實驗 取同一批號已知含量的供試品2.5g6份，分別加入濃度為10.13mg/ml的內標物萘1ml和一定量的薄荷腦對照品溶液，按含量測定方法分別進行供試品溶液制備、測定，結果表明此方法的回收率符合要求。
      以上方法學考察結果證明，該方法靈敏度高，精密度好，重現性及回收率變異系數均在3%以下，符合《中藥新藥研究的技術要求》中“質量標準”部分的規定。

3 、討論
    3.1 系統條件的選擇 通過查閱資料，我們選擇了3個系統條件:（1）檢測器為FID;柱溫為150℃;進樣器溫度為230℃;檢測器溫度為230℃。（2） 柱溫的初始溫度為120℃，保持2min，先以每分鐘2℃的升溫速率升至140℃，保持2min，在以每分鐘10℃的升溫速率升至190℃，保持 10min，分流比為20:1。（3）進樣口溫度為250℃，檢測器溫度為250℃，分流比為25:1，柱溫為60℃，保持5min，以每分鐘5℃的升溫 速率升至100℃，保持2min。
      系統（1）、（2） 測定得到的薄荷腦峰不能達到記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線。>基線分離；系統（3）測定得到的薄荷腦峰與鄰近峰達到記錄器所記錄 的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線。>基線分離且分離度超過1.5，分離效果好，故采用系統（3）作為測定腫痛氣霧劑中薄荷腦含量的系統條件。
    3.2 提取溶媒的選擇 根據腫痛氣霧劑質量標準(試行)首先選擇丙酮作為溶劑，出現的溶劑峰復雜，得到的薄荷腦峰不能達到記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基 線。>基線分離。考慮到藥液里含有乙醇，因此選擇了40%、60%、80%、90%及無水乙醇等不同濃度的乙醇作為溶劑進行比較，結果是無水乙醇作 為溶劑測定時得到的薄荷腦峰能達到記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線。>基線分離，且內標物萘在無水乙醇中易溶解。通過系統研究和方 法學驗證，上述的方法與原來的方法相比較，本法具有前處理簡便、靈敏、準確等優點，為其質量控制提供了更科學的依據。