樣品制備&操作步驟丨AF 555偶聯試劑盒

AF 555標記試劑盒設計用于直接從含有游離氨基的蛋白質、肽和其他配體制備555。AF 555偶聯試劑盒提供了一種簡單快速的方法標記抗體、蛋白質、多肽等含有游離氨基的樣本。AF 555偶聯試劑盒應用于偶聯標記。

艾美捷AF 555偶聯試劑盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

AF 555偶聯試劑盒供應材料和儲存條件：

注：純化柱適用于分子量在100KD至200KD之間的樣品；如果試劑殘留，請及時密封并在-20°C下儲存

樣品制備：

待標記樣品的初始濃度應高于2 mg/mL。提示蛋白濃度在2.5mg/mL以上。否則，在實驗之前需要增加蛋白質濃度。待標記樣品的成分（或儲存緩沖液）應符合以下要求：

（1）不含氨基成分，否則會影響偶聯效果。

（2） 少量BSA不會影響偶聯效果。建議使用PBS作為存儲緩沖液。

（3） 如果樣品中含有可能干擾標記的物質，建議用PBS代替緩沖液。具體方法如下

將樣品加入超濾膜中，加入200-150μL PBS。在12000 g、4°C、10分鐘的溫度下離心，然后濾出濾液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分鐘下離心。離心后，取出超濾管的內芯，將其置于干凈的外管中，并在4000g，4℃，2分鐘下離心以收集樣品

操作步驟：

以下操作步驟基于3×100μg規格。對于其他規格，請相應地調整日期。如果您需要調整體積，請保持樣品大小不變，并更改標記系統中的“FlyLink”“AF 488標記溶液、“Activated FlyLink”AF 488溶液和去離子水的體積。

1.將15μL FlyLink“”AF 488標記溶液加入待標記的樣品溶液中，并用移液管輕輕混合。

2.用移液管將7.5μL的Activated FlyLink“”AF 488溶液移到步驟1中的反應溶液中，加入去離子水至150μL（注：此體積為標記系統），輕輕混合，在37°C的黑暗中靜置1h。

注：步驟1/2屬于標記步驟。

3.向步驟2中的反應溶液中加入適量PBS（固定體積約為500μl），輕輕混合

將溶液移至純化柱。在4℃、12000g離心10分鐘。

4.丟棄濾液，向純化柱中加入適量PBS（固定體積約500μL）。

在4℃下以12000g離心10分鐘。

5.取出純化柱，將其倒置在干凈的離心管中，在4℃下以4000g離心2分鐘。

離心管中收集的溶液是偶聯產物。

注：步驟3/4/5為純化步驟。該偶聯物在4°C的黑暗中可以穩定一個月以上。為了長期保存，綴合物應裝在小份中，置于-20°C的黑暗中，并加入相同體積的甘油。避免重復冷凍和解凍。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE530-3.shtml