AF 488偶聯試劑盒樣品制備及操作步驟

偶聯試劑盒的特點是備齊各種用品使用更方便，效率經過優化后更高，可以直接制備得到一個完整的親和層析柱。

AF 488標記試劑盒提供了一種簡單快速的方法標記抗體、蛋白質、多肽等含有游離氨基的樣本。該試劑盒設計用于直接從含有游離氨基的蛋白質、肽和其他配體制備488，應用于偶聯標記

艾美捷AF 488偶聯試劑盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

AF 488偶聯試劑盒樣品制備：

待標記樣品的初始濃度應高于2 mg/mL。提示蛋白濃度在2.5mg/mL以上。否則，在實驗之前需要增加蛋白質濃度。待標記樣品的成分（或儲存緩沖液）應符合以下要求：

（1） 不要含有氨基成分，否則會影響偶聯效果。

（2） 少量BSA不會影響偶聯效果。建議使用PBS作為存儲緩沖液。

（3） 如果樣品中含有可能干擾標記的物質，建議用PBS代替緩沖液。具體方法如下

將樣品加入超濾膜中，加入200-150μL PBS。在12000 g、4°C、10分鐘的溫度下離心，然后濾出濾液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分鐘下離心。離心后，取出超濾管的內芯，將其置于干凈的外管中，并在4000g，4℃，2分鐘下離心以收集樣品。

待標記樣品的成分（或儲存緩沖液）要求清單：

注：請根據實際樣品體積，放大或縮小試劑盒各成分在反應系統中的體積。（例如FlyLink? AF 488標簽套件）

不同規格的推薦合適標簽樣本量和標簽系統如下：

Size    Amount of Sample    Optimal Labeling System

3 ×100 μg     3×100 μg       3×50-3×75 μL

1 mg         1 mg         500-750 μL

以下操作步驟基于3×100μg規格。對于其他規格，請相應地調整日期。如果您需要調整音量，請保持樣本大小不變，并更改FlyLink的音量? AF 488標簽解決方案，Activated FlyLink? AF 488溶液和去離子水。1.添加15μL FlyLink? AF 488將溶液標記到待標記的樣品溶液中，并用移液管輕輕混合。2.移液管7.5μL活性FlyLink? AF 488溶液加入步驟1中的反應溶液中，加入去離子水至150μL（注：此體積為標記系統），輕輕混合，并在37°C的黑暗中靜置1小時。

注：步驟1/2屬于標記步驟。

3.向步驟2中的反應溶液中加入適量PBS（固定體積約為500μL），輕輕混合，將溶液移至純化柱中。在4°C下以12000 g離心10分鐘。

4.丟棄濾液，向純化柱中加入適量PBS（固定體積約500μL）。在4°C下以12000 g離心10分鐘。

5.取出純化柱，將其倒置在干凈的離心管中，在4000g下離心2分鐘4°C。離心管中收集的溶液為偶聯產物。

注：步驟3/4/5為純化步驟。該綴合物在4°C的黑暗中可以穩定一個多月。為了長期保存，綴合物應裝在小份中，置于-20°C的黑暗中，并加入一定體積的甘油。避免重復冷凍和解凍。