毛細管反相液相色譜2串聯質譜用于肽的鑒定和相對定量分析

摘要:建立了一種基于毛細管反相液相色譜2串聯質譜聯用技術和質譜峰強度數據處理的肽段鑒定和相對定量分析方法。該方法無需對樣品中的肽進行化學標記,在對樣品進行反相色譜分離和串聯質譜分析后,將二級質譜掃描數據進行蛋白質數據庫搜索,獲得所鑒定肽段的序列、保留時間、質荷比、帶電荷數等定性信息; 再以此為定位依據,在全掃描質譜數據中提取該肽段對應的離子峰并以該離子峰的峰強度作為定量信息,從而實現對不同樣品中的共有肽段進行差異比較分析。以標準蛋白酶解混合肽段為實驗對象,以肽段相對強度的相對標準偏差為指標,考察了該方法用于肽段相對定量分析的重現性、檢測動態范圍以及濃度標準曲線等,為將該方法用于生物樣品中內源性肽的差異分析奠定了基礎。