基于保留時間和質荷比匹配的液相色譜2質譜聯用技術用于非標記肽段的差異分析

摘　要　建立了一種無需化學標記的,基于納升級毛細管液相色譜2電噴霧離子阱質譜聯用技術和質譜數據處理的肽段差異分析方法。本方法采用定量差異分析與肽序列鑒定分析分別進行的策略,首先對樣品進行質譜全掃描的液質全譜式分析,在全掃描質譜數據中提取肽特征點信息,通過保留時間和質荷比參數匹配不同樣品中的共有肽特征點,比較其相對峰強度有無差異。最后對樣品中存在豐度差異的肽特征點進行選擇性二級質譜分析和序列鑒定,從而實現復雜樣品中肽段的差異比較分析。以血漿蛋白酶解混合物為實驗對象,考察了本方法用于肽段相對定量分析的重現性以及濃度信號響應曲線等。結果表明:提取的肽特征點峰強度相對標準偏差的中值< 22% ,肽段離子強度動態范圍達3個數量級,在5～1000 fmol范圍內對肽段定量具有良好線性關系。本方法可用于不同條件樣品中具有倍數差異的內源性肽的比較分析。