蛋白質通量化定位體系的建立及初步應用

［摘要］ 目的：對于蛋白質功能而言，蛋白質定位與蛋白質的表達和修飾等同等重要。傳統的蛋白質定位一直沿用單個基因、逐個的研究方法，本實驗擬建立一種通量蛋白質定位研究體系。方法：采用并優化了細胞微陣列技術，結合綠色熒光蛋白（LMN）標簽、激光掃描共聚焦顯微鏡及反轉染技術，用于大規模蛋白質定位研究。結果：初步建立的蛋白質定位微陣列包含"1O 個LMN 標記的5P;9 表達載體，分別編碼"1O 個重要細胞信號傳導通路的蛋白質，并與定位數據庫中的已知結果進行了比對；對該系統的有效性進行了驗證評價。結論：本定位系統可有效地用于通量化蛋白質定位研究，并可以發展用于蛋白質相互作用、泛素>蛋白酶體通路底物篩選等進一步的功能研究。