SD 大鼠視網膜蛋白質組雙向電泳圖譜建立和初步分析

【摘要】　目的　建立優化SD 大鼠神經視網膜雙向電泳(two2dimensional gel electrophore2sis ,22DE) 圖像技術方法,并對正常視網膜蛋白質組圖像進行初步分析。方法　雄性SD大鼠,斷頸處死取眼球。在解剖顯微鏡下分離神經視網膜組織,液氮速凍,提取總蛋白質組份, - 70 ℃保存。部分視網膜標本立即固定后做光鏡或電鏡分析。應用22DE 技術,對提取的蛋白質進行分離。在一維等點聚焦、垂直SDS 凝膠電泳、銀染(考染) 等關鍵技術上進行優化和重復實驗,建立分辨率高和重復性良好的22DE 圖像;聯合圖像掃描和圖像分析軟件,對正常SD 大鼠神經視網膜組織蛋白質組圖像進行初步分析。結果　成功獲得了分辨率和重復性良好的視網膜蛋白質22DE 圖譜。每張電泳圖譜可獲得約3 000個左右可辨認的蛋白質斑點。其中大部分蛋白質點分布在pH4～8 范圍內,其相對分子質量主要集中在25～100 區域。結論　22DE 技術可用于對神經視網膜蛋白質組份的分離和鑒定。本實驗建立的技術為進一步進行視網膜蛋白質組學研究奠定了基礎。