重組胸腺素A1 的分離純化和活性測定

摘　要: 目的　利用融合表達載體pTh ioH isA 的重組質粒pTh ioH isA 2TA1④, 轉化大腸桿菌TO P10 得到的工程菌, 來分離純化表達的胸腺素A1 ( thymo sin alpha 1, TA1). 方法　將高效表達融合蛋白的工程菌用細胞破碎器裂解, 經80℃熱處理, 離心上清采用Q 2Sepharo se FF 陰離子交換色譜純化融合蛋白. 融合蛋白經CNB r 裂解后用常壓離子交換色譜純化TA1 單體. 應用SDS2PA GE, 2L 2T ricine2SDS2PA GE 和HPLC進行鑒定. 結果　SDS2PA GE 分析表明菌體表達的融合蛋白占菌體總蛋白的400 g·kg- 1. 經2L 2T ricine2SDS2PA GE 分析證實, 融合蛋白可裂解出TA1 單體, 裂解物經簡單的離子色譜可以純化出TA1 單體, HPLC 鑒定純化出的TA1 純度可達950 g·kg- 1以上. 利用3H2TdR 進行的生物活性測定表明, 在致有絲分裂原ConA 存在的條件下, 融合蛋白和TA
1 單體均具有刺激小鼠脾淋巴細胞分裂增殖的能力, 與化學合成的TA1 相比具有相似的生物活性. 結論　該方法是分離純化TA1 簡便易行, 經濟有效的方法; 同時也為TA1 的分離純化和大規模的開發生產奠定了基礎.