人松弛素原樣蛋白H2 在大腸桿菌中的表達、分離純化及鑒定

摘要　利用聚合酶鏈式反應方法, 從含有人前松弛素原cDNA 基因的質粒pMAL p2X- hRLX H2 上得到人松弛素原H2 的編碼基因, 亞克隆到溫度誘導型原核表達載體pBV220 上, 轉化大腸桿菌DH5α細胞。經42 ℃溫度誘導, 獲得了目的基因的高效表達。目的蛋白質以包含體的形式存在于大腸桿菌細胞中。菌體經過超聲波破碎, 包含體裂解, 蛋白質的體外變性還原, 復性, Sephadex G275 凝膠過濾層析, 反相快速蛋白質液相層析等一系列分離純化過程, 得到了高純度的重組Met2人松弛素原樣蛋白H2 , 得率約為2～3 mg/ L 。對純化的目的蛋白質進行了SDS2PAGE 電泳純度分析, 氨基酸組成分析, 通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜法測得目的蛋白質的分子量為18 390. 4 (理論計算值為18 392. 3) 。