淺析趨化因子家族成員之CCL5與腫瘤的關系研究

趨化因子是一類在炎癥反應中可誘導白細胞募集和激活的多肽蛋白，可介導多種免疫細胞進入腫瘤微環境，幫助T細胞進入腫瘤并影響腫瘤免疫和治療效果。趨化因子 CCL5是趨化因子家族成員之一,主要定向趨化和激活 T 淋巴細胞和 NK 細胞，在腫瘤和炎性疾病中發揮重要作用，進行CCL5原核表達系統表達研究可以為研究該基因的生物學活性提供研究基礎。

趨化因子是通過結合細胞膜表面不同類型的趨化因子受體而發揮作用的,一方面趨化因子定向募集白細胞在感染局部發揮抗感染作用,另一方面其誘導的局部炎癥反應易造成局部的組織損傷。其在炎癥、肝組織纖維化、腫瘤逃逸、血管生成等機體多種病理生理過程中發揮主導作用,部分趨化因子及其衍生物或抑制物具有潛在的臨床應用前景。趨化因子(CCL5)是由正常T細胞分泌的典型的具有趨化活性的細胞因子,分子量8kD,屬于CC型趨化因子的β家族成員之一,并調控T淋巴細胞的活性和分泌能力,其可以介導單核細胞、淋巴細胞等的趨化作用，并參與傷口的愈合過程。

CCL5 主要有 CCR1、CCR3、CCR4 和 CCR5 等相受體。CCL5具有介導免疫細胞定向趨化的作用，能增強腫瘤細胞浸潤與轉移的能力，腫瘤的浸潤與轉移是惡性腫瘤生物學行為中的主要特性，研究表明CCL5血清水平和胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤分期及疾病進展相關，可能成為預測相關腫瘤預后的分子標志。

1、趨化因子CCL5原核表達研究

利用基因工程技術如原核表達系統來表達CCL5蛋白，可以為獲得足夠多的CCL5蛋白來進行下一步研究，如研究CCL5的基因功能和篩選CCL5抑制劑提供研究基礎。

有研究者實現了克隆小鼠趨化因子CCL5基因并在原核表達系統中的表達,獲得與His標簽融合的重組趨化因子mCCL5蛋白,并測定其在體外的趨化活性^[1]。研究者將趨化因子CCL5基因擴增并插入pET-28a原核表達載體,轉化至Rosetta感受態細胞中，重組mCCL5蛋白以IPTG誘導表達,再以Ni-NTA純化系統進行純化.Transwell實驗檢測重組CCL5蛋白的趨化活性。結果顯示pET-28a-mCCL5原核表達載體成功構建,mCCL5蛋白在細菌中大量表達并主要以包涵體的形式存在.表達產物以SDS-PAGE和免疫印跡鑒定,Transwell實驗證實趨化因子能夠顯著促進巨噬細胞RAW264.7細胞的遷移.帶有His標簽重組鼠趨化因子CCL5的成功表達,為下一步CCL5抑制劑的篩選奠定基礎。

2、趨化因子CCL5表達與腫瘤的關系

CCL5在血小板、巨噬細胞、腎小管上皮、滑膜成纖維細胞和一些特定腫瘤細胞均有表達。研究發現乳腺癌患者中CCI_5的表達與疾病進展直接相關，有研究者通過對2254個人乳腺癌標本的微陣列分析發現，在基底型和HER-2亞型的標本中CCL5和CCR5表達升高。該研究證實了CCL5/CCR5在基底型乳腺癌侵襲力中的作用，并且提示CCR5拮抗劑可作為輔助治療手段降低該亞型患者腫瘤轉移的風險。另外，在宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌和黑色素瘤患者的組織和血清中CCL5的表達與疾病進展具有相關性。

使用基因工程技術來獲得足夠多的CCL5蛋白來研究其生物學活性，并進一步探討CCL5導致疾病或者癌癥形成的分子機制，有望為判斷腫瘤預后提供一種新的分子生物學指標，同時還可為膀胱癌的靶向治療提供特異性的靶點，有助于抗腫瘤藥物的研發。

[1] 鼠CCL5蛋白的原核表達與純化[J].