18O穩定同位素標記定量蛋白質組研究技術的建立與優化

摘　要　建立了18O穩定同位素標記方法,用于復雜體系蛋白質相對定量分析。對影響蛋白質標記穩定性的實驗條件進行了比較和優化。結果表明,采用酶切后標記的方法,酶切肽段在胰酶催化下,在pH 5. 0 的K2HPO4 /KH2 PO4緩沖體系中, 37℃18O標記反應16 h,絕大部分肽段即可達到100%的標記效率。對多個16O /18O成對肽段峰強度的動態范圍及定量準確度進行了考察。結果表明, 18O標記方法是一種簡便、穩定、可靠的相對定量方法, 10倍動態范圍內,標記率相對標準偏差在18. 4%以內, 16O /18O峰強度呈很好的線性關系。本實驗考察了標記后的肽段在不同溶液體系中的穩定性,為復雜樣品的預處理和預分離的溶液條件提供了依據。