槐甙對大鼠骨細胞的作用研究

槐甙屬于天然黃酮類物質，細胞藥效學研究表明槐甙與其代謝物染料木素均能顯著抑制體外培養破骨細胞的分化成熟的骨吸收能力，具有破骨細胞骨吸收抑制功能。因此結合動物試驗結果可以確定槐甙可以口服吸收入血分布到骨組織，具有對成骨細胞骨形成促進與破骨細胞骨吸收抑制雙重作用。該研究結果支持槐甙成為一種用于預防和治療老年婦女的骨質疏松癥的藥物。

藥效學的深入研究包括細胞水平和分子水平的分析研究。細胞藥效學研究是在細胞水平研究藥物作用并分析作用機理的實驗方法，該方法不僅可以確定藥物的治療作用，還能確定藥物的一般藥理作用，為新藥臨床試驗提供可靠依據，美迪西提供細胞藥效學研究服務。

1、大鼠體外骨細胞藥效學研究

采用新生大鼠頭蓋骨酶消化法分離培養成骨細胞，取2-3繼代細胞給予10^(-12)M、10^(-10)M、10^(-8)M、10^(-6)M、10^(-4)M濃度槐甙，72小時后用MTT法與對硝基苯磷酸鹽法（PNPP）法檢測細胞增殖與ALP活性。MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。應用新生1-3天齡大鼠四肢長骨機械法分離破骨細胞，給予10^(-8)M、10^(-6)M濃度槐甙，72小時后用染色計數TRAP陽性破骨細胞數，染色計量骨吸收陷窩面積，同時設0(助溶劑)與陽性藥物(染料木素與雌二醇)對照。

槐甙與0對照比較顯示，10^(-12)、10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)、10^(-4)mol/L濃度槐甙顯著提高MTT與ALP檢測的OD值(P<0.05-0.01)。染料木素僅10^(-8)組的增殖刺激作用具有統計學意義(P<0.05)；雌二醇10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)濃度組的增殖刺激作用均顯示統計學意義(P<0.01)。

對OB分化的影響，與空白組比較，10^(-12)、10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)、10^(-4)mol/L濃度槐甙對OB均具有分化刺激作用(P<0.05-0.01)；染料木素僅在10^(-8)、10^(-6)mol/L濃度組顯示顯著分化刺激作用(P<0.01)；雌二醇10^(-10)、10^(-8)、10^(-6)濃度組的分化刺激作用均顯示統計學意義(P<0.01)。

中、高濃度槐甙、染料木素和雌二醇對體外培養TRAP陽性破骨細胞數均具有顯著抑制作用(P<0.01-0.001)；與對照組比較，抑制率達20.3%-36.1%，其中10^(-6)濃度組雌二醇的抑制率為36.1%；10^(-8)槐甙組為34.8%。槐甙、染料木素和雌二醇各濃度組對體外培養破骨細胞骨吸收均具有抑制作用，除雌二醇中濃度組，其余均具有統計學意義(P<0.05-0.01)；骨片吸收陷窩面積抑制率達22.68%-46.78%。

因此得出結論槐甙能直接吸收入血分布到相關組織和靶細胞中，其代謝物大部分轉變成染料木素，骨是槐甙和染料木素的共同靶器官之一。槐甙低、中、高濃度均顯著提高成骨細胞的增殖與分化刺激作用，具有骨形成促進作用；染料木素僅在中等濃度組才顯著增殖與分化刺激成骨細胞。因此槐甙與染料木素均能顯著抑制體外培養破骨細胞的分化成熟的骨吸收能力，具有破骨細胞骨吸收抑制功能。

2、槐甙對于去卵巢大鼠骨量丟失具有預防作用

大鼠去卵巢建立絕經后骨質疏松癥動物模型觀察槐甙對雌激素缺乏引起的骨量丟失的預防作用。

將5 0只SD雌性大鼠隨機分為假手術 (SHAM )組、去卵巢 (OVX)組、槐甙低劑量組 ( 4mg.kg-1.d-1)、槐甙中劑量組 ( 8mg.kg-1.d-1)、槐甙高劑量組 ( 16mg.kg-1.d-1)，造模 3d后進行藥物干預，服藥 1個月后處死，對脛骨近端及腰椎進行形態計量學分析。

結果發現OVX組大鼠與SHAM組比較，脛骨近端和腰椎骨量分別丟失了32.97%和 2 9.31%；骨小梁寬度變窄，節點數明顯減少 (P <0.0 5 )；骨小梁間距增大 (P <0.0 5 )。槐甙中、高劑量組對去卵巢引起的骨量丟失有較好的預防作用，與OVX組比較，脛骨骨小梁骨量分別上升 15.2 8%和 2 2.81% ,第三腰椎骨小梁骨量分別上升 14.2 3%和 2 1.2 %；兩組骨小梁寬度變寬，節點數明顯增加 (P <0.0 5 )；骨小梁間距減小 (P <0.0 5 )。低劑量則無明顯治療效果。

因此得出結論，中高劑量槐甙可以有效恢復骨組織的形態，提高骨量，在骨質疏松癥的治療中發揮作用。