高效液相色譜分離純化血管緊張素轉換酶活性抑制肽

摘要:采用分步高效液相色譜法首次從菠菜核酮糖雙磷酸羧化酶(英文縮寫為Rubisco) 的胃蛋白酶2胰酶復合酶水解產物中分離純化了血管緊張素轉換酶(ACE) 活性抑制肽。水解產物經ODS 柱分離得到活性組分,這些活性組分再依次經過氨基柱(PhA) 、氰基柱(CN) 和硝基苯乙基柱(NPE) 4 種色譜柱分離后,得到4 種高度純化的、具有抑制ACE 活性的多肽。經蛋白質序列自動分析儀測定,4 種多肽的結構分別為MRWRD ,MRW , IAYKPAG和LRIP2VA。采用固相多肽合成法分別合成了這4 種肽,并采用測定ACE 活性抑制率的方法評價其活性大小,結果其抑制ACE 活性50 %的濃度值( IC50值) 分別為211 ,016 ,412 和0138μmol/ L 。通過對照菠菜Rubisco 的氨基酸序列,確認IAYKPAG來自于菠菜Rubisco 的小亞基,而其余3 種多肽則來自于菠菜Rubisco 的大亞基。該法具有分離效率高、快速簡單、干擾小、重現性好和不易丟失水解蛋白質中活性成分的優點。