裸鼠成瘤實驗有助于發現卵巢癌基因治療的新靶點

無胸腺裸鼠，簡稱裸鼠，是醫學生物學研究領域中不可缺少的實驗動物模型。裸鼠成瘤實驗在腫瘤學、免疫學、藥品與生物制品的安全性評價及有效藥品的篩選等方面，有著特殊的價值。卵巢癌裸鼠移植瘤模型按腫瘤來源可分為人卵巢癌切除標本實體瘤和人卵巢癌細胞株；按接種后所在部位分為皮移植裸鼠模型、腹腔種植裸鼠模型、裸鼠體內原位移植模型。

在裸鼠成瘤實驗中，有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生長速度很快，建議用幾只動物來試試不同的接種濃度，萬一能夠長出來，而且還長得很快，那就要根據情況選擇一個合適的濃度了。美迪西藥理學服務可提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等試驗。

裸鼠成瘤試驗中，接種部位一般為腋窩中部外側皮下，在皮下腫瘤模型中，想要成瘤率高就接種在腋下。接種時由裸鼠體側腰部稍靠上的部位進針，要保證與接種點的距離小于針頭的長度，向頭部方穿行，絕對不能刺破皮膚或者刺破肌肉層，當針頭到達接種位點時注射，退出針頭，這樣操作的目的并不完全是避免漏液，其實熟練后，不需要皮下穿行也不會漏液，主要是避免污染，進針點還有少量污染的可能性的，針頭在皮下穿行一段后，接種點離進針點較遠，最大限度減少污染的可能。另外裸鼠理論上是1個裸鼠只能接種1針，形成1個腫瘤，因為2個或者以上的腫瘤是會相互影響的。  

為了分析慢病毒轉染沉默人轉錄激活因子5(Activating transcription factor5，ATF5)后，對卵巢癌SKOV-3細胞體外增殖、凋亡及體內成瘤的影響，通過體外和體內的實驗研究來探討卵巢癌的基因治療，探索沉默ATF5的表達后，能否開辟卵巢癌治療的新方法。方法如下：

1、慢病毒攜帶小于擾RNA，分別將構建好的攜帶RNA干擾質粒(沉默ATF5)和空載體的慢病毒感染生長良好的卵巢癌SKOV-3細胞和卵巢癌SKOV-3細胞進行對照，對比觀察細胞的生長狀態。　　

2、MTT法檢測細胞的增殖生長。

3、羅氏凋亡檢測試劑盒檢測細胞凋亡。

4、采用裸鼠皮下接種細胞的方法，于裸鼠皮下接種成瘤，觀察各組裸鼠的存活狀態、種植瘤生長情況，進一步計算成瘤率。

5、RT-PCR檢測移植瘤ATF5 mRNA的表達情況。

6、Western-Blot檢測移植瘤ATF5蛋白的表達情況。

7、HE染色觀察瘤組織組織學變化。

結果:

1、在體外培養條件下，SKOV-3的生物學形態沒有明顯差異。在相同培養時間內細胞的增殖無統計學意義，但RNA干擾的實驗組細胞凋亡數量較其他兩組明顯增多。

2、皮下接種成瘤后，三組裸鼠的成瘤率沒有明顯區別，但RNA干擾組腫瘤成瘤時間晚，生長緩慢。

3、移植瘤組織RT-PCR顯示RNA干擾組mRNA表達量與其他對照組相比差異有統計學意義(P＜0.05)。

4、瘤組織Western-Blot顯示RNA干擾組ATF5蛋白表達差異有統計學意義(P＜0.05)。

5、HE染色法觀察RNA干擾組分裂相明顯減少，凋亡現象明顯。

試驗最終得出的結論是沉默ATF5的表達后人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生長緩慢，這可能成為卵巢癌基因治療的新靶點。

用卵巢癌細胞株建立裸鼠模型用于卵巢癌的實驗研究時，因為不同的卵巢癌細胞株將構建不同生物學特點的裸鼠模型，因此在構建卵巢癌裸鼠模型時必須掌握不同的卵巢癌細胞株所具有的不同特性，以利于選擇利用這種特性進行卵巢癌的相關實驗研究。