淺析蛋白分離純化的一般原則

蛋白質的分離純化在生物化學研究應用中使用廣泛，是一項重要的操作技術，也是目前的研究熱點之一，目前我國也有不少醫藥研發外包服務公司提供了蛋白分離服務。美迪西生物醫藥是一家臨床前醫藥研發外包服務公司，可以根據客戶要求，承接從mg到kg級的化合物純化分離服務。蛋白質的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務，但對任何一種蛋白質都有可能選擇一套適當的分離提純程序來獲得高純度的制品。蛋白的分離純化應遵循以下原則：

1、總體原則 

（1）純化前對樣品的來源，目的蛋白的理化性質及生物活性要做充分了解。

 （2）純化前明確純化所要達到的目的及目標。

 （3）根據所要達到的目的在回收率，純度，成本等之間合理取舍次要指標，把主要指標放在第一位。如科學研究，鑒定蛋白結構，純度就是第一指標，回收率等次之。

2、純化過程

    純化每一步都充分利用目標蛋白和雜質成分理化性質差異。如大腸桿菌菌體蛋白大多是一些低分子量蛋白（<50000Da），且酸性蛋白較多。

3、純化方法的選擇

        根據蛋白理化特性選擇分離材料和純化方法，避免利用相同技術進行多次純化；對純化方法，及各種方法的適用性，各種方法的差異性做充分的了解。如排阻層析不適合用于分子量相差不到10%的樣品的分離。

4、不同階段突出重點

（1）純化早期盡量減少樣品處理體積，方便后續純化，如目的蛋白在發酵液中，前期用鹽析，膜過濾等方式去除大量的水分和小分子雜質。

 （2）純化后期由于樣品處理量和雜質量都已減少，可使用價格昂貴的高效分離材料進行精制，利于降低分離純化成本，提高產品收率和純度，實現工藝性價比最優化。