大腸桿菌T蛋白的高效表達和分離純化

摘要:目的　構建高效表達菌株,以大量表達大腸桿菌T 蛋白,為后續的新藥作用靶點研究提供活性蛋白質材料。方法　利用高效表達質粒p ET26b + 克隆了大腸桿菌TyrA 基因,并在其C 端融合了一個由6 個組氨酸組成的his2tag 以利分離純化。結果　T 蛋白的表達量達每1 L 培養液200 mg ,細胞裂解液經一次his2tag 親和柱色譜,純度達98 % ,分支酸變位酶和預苯酸脫氫酶的比活性分別為130 和98 U·mg - 1 。結論　本法表達的大腸桿菌T 蛋白,表達量高,純化容易,酶活性正常,為進一步研究T 蛋白的結構與功能,并進行新藥設計奠定了基礎。