豬腦谷氨酸脫羧酶的分離純化以及生物學活性鑒定

摘　要:L-谷氨酸脫羧酶是γ-氨基丁酸合成的關鍵限速酶,廣泛的存在于脊椎動物神經細胞以及β2胰腺細胞,是胰島素依賴型糖尿病( IDDM) 病人以及僵硬綜合癥(SMS) 病人血清的關鍵抗原。運用sephancryl S-200 以及DEAE-sepharose 可以從豬腦中分離純化出谷氨酸脫羧酶。純化的GAD 在變性條件下電泳,經考馬斯亮藍R250 染色以及Western2Blot 鑒定主要有兩條帶,分子量分別為67 kD 和44 kD。根據L2谷氨酸脫羧酶能夠分解谷氨酸產生γ-氨基丁酸和CO2 的特性,通過測定產物γ-氨基丁酸推斷酶活。以上實驗結果表明從豬腦中分離純化到的是具有生物學活性以及免疫原性的谷氨酸脫羧酶,可進一步改良為IDDM檢測試劑盒,用于IDDM的預防和預測。