人組織金屬蛋白酶抑制因子23的分離純化及其生物學性質

[摘要] 目的: 從人胎盤中分離、純化組織金屬蛋白酶抑制因子23 ( TIMP23) , 并對其對基質金屬蛋白酶21 (MMP21)的抑制作用進行評價。方法: 利用含4 mol/L 尿素的Tris2HCl緩沖液(pH 8. 0) , 從除去多數水溶性蛋白的胎盤勻漿液中提取難溶性蛋白。經CM52陽離子交換樹脂和Sephacryl S2200凝膠過濾兩步柱層析純化后, 用SDS2PAGE鑒定TIMP23 的純度; 用EIA和Western blot檢測TIMP23的含量; 用免疫熒光測定法檢測TIMP23對MMP21的抑制活性。結果: 人胎盤來源的TIMP23由相對分子質量(M r )為24 000的非糖化蛋白和M r 為27 000的糖化蛋白組成。非糖基化的TIMP23對MMP21的IC50為1. 1 ×10 - 10 mol/L, 糖基化的TIMP23為1. 2 ×10 - 10mol/L, 顯著高于重組的TIMP23 ( IC50為8 ×10 - 8 ) 。結論: 人胎盤來源的TIMP23由M r 為24 000的非糖基化蛋白和M r 為27 000的糖基化蛋白兩部分組成, 二者對MMP21均具有明顯的抑制作用。