意蜂蜂王漿超氧化物歧化酶的分離純化及部分性質

摘要: 以意蜂Apis mellifera 蜂王漿為材料,經過硫酸銨分段鹽析,DEAE2Sepharose 柱層析和Sephacryl S2200 凝膠過濾,得到純化的超氧化物歧化酶(SOD) ,純化倍數104.00 ,比活力53105 UPmg。該SOD 經SDS2PAGE 顯示單一蛋白帶。溫度對該酶活力的影響較小。Cu、Zn、Fe 和Mn 等元素含量測定發現該酶只含有Cu 和Zn。酶經圓二色譜測定后,其α螺旋、β折疊和無規則卷曲蛋白構型的含量分別為2611 %、5318 %和2210 %。等電聚焦電泳測得酶的等電點為4169、4185 和5101。NRPR 單向和雙向SDS2PAGE表明該酶含有鏈內二硫鍵。氨基酸組成分析發現該酶由約402 個氨基酸殘基組成,其中Asp 、Gly、Leu、Ala、Glu 和Val 的含量較高。脲可抑制SOD 活性,并使其紫外光譜發生變化,熒光發射峰強度變小。溴乙酸(BrAc) 抑制酶的活力,使其紫外光譜發生變化,熒光發射峰強度變小。二巰基蘇糖醇(DTT) 使酶的活力發生變化,紫外吸收峰增大,熒光發射峰變小。