重組長鏈脂肪酸醇氧化酶的分離純化及特性研究

目的：從fao基因轉化的E. coli BL21 /DE3菌分離純化重組釀酒酵母長鏈脂肪酸醇氧化酶,并對其理化性質進行研究。方法：應用硫酸銨分級沉淀，phenyl2sepharose HR 5 /5層析等方法分離純化長鏈脂肪酸醇氧化酶,應用SDS2PAGE電泳測定其相對分子量,并對其Km、酸堿穩定性及其底物特異性進行分析。結果: 應用上述分離方法得到電泳呈單一條帶的酶蛋白,相對分子量大約為64 000,得率為17. 6%以上;該酶對十二烷醇的Km在2. 5和3. 0μmol/L之間,最適pH值為8. 5,在pH 7. 0環境中,酶活性為pH 8. 5時的60%;對十二烷醇催化的相對活性較其它一些長鏈的二醇和脂肪酸醇為高。結論: 從fao基因轉化的E. coli BL21 /DE3菌分離出重組釀酒酵母長鏈脂肪酸醇氧化酶,該酶為堿性酶,其最適底物為十二烷醇,但也可氧化一些長鏈的二醇和脂肪酸醇。