鼻咽癌人源抗獨特型基因工程抗體的原核表達及鑒定術

摘要：目的構建鼻咽癌人源抗獨特型單鏈抗體原核表達裁體，對其產物做初步鑒定，為鼻咽癌疫苗制備奠定基礎。方法采用分子克隆技術，PcR擴增G22scFv基因，并將其克隆到原核表達栽體pET25b(+)上，將重組子轉化大腸桿菌BL21 pE3)，經IPTG誘導表達后，表達的蛋白經His一魄純化試劑盒純化后復性。sDs—pA(IE及weStem blot分析融合蛋白。結果構建的原核表達載體pET25b(+)一G22經測序檢測，序列正確。在大腸桿菌中G22scFv以包涵體形式獲高效表達，sDs—PAGE及westem blot鑒定表達的目的蛋白Mr為25 kD，同時證實載體構建及表達均正確。目的蛋白經試劑盒純化后電泳分析純度迭95％以上。結論利用基因重組技術，在原核細胞中表達出重組G22scFv并得到純化，為研究鼻咽癌疫苗打下了基礎。