免疫火箭電泳技術

一、原理

定量的抗原加入到含有一定量的相應抗體的瓊脂糖凝膠中，在電場作用下，引起抗原抗體的遷移和相互反應，當比例合適時形成肉眼可見的沉淀峰，由于電泳繼續進行，樣品孔不斷有抗原移向抗原抗體復合物的沉淀峰，因抗原過剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗體復合物的沉淀峰。如此反復向前，直到再無游離抗原而反應終止，形成上行火箭狀的沉淀峰，其沉淀峰高度和抗原的濃度成正比，與同樣條件下的已知濃度的抗原血清比較，即可求得待測血清的抗原含量。

二、試劑(以apob為例)

1.瓊脂糖。

2.巴比妥鈉緩沖液(μ=0.05，ph=8.6):巴比妥鈉10.30g，巴比妥1.84g、甘氨荎1.0g、peg 60004g，加900ml水加溫助溶，待冷，加1mol/l調ph至8.6，混勻，轉入1000ml容量瓶內，再加水到刻度，測試ph后裝瓶待用。

3.羊抗人apob血清(效價1：128以上)

4.apob標準血清。

5.固定液：1%鞣酸或10%三氯醋酸。

6.氨基黑10b染色液：氨基黑10b0.1g，溶于100ml甲醇-醋-水溶液(7：1：2)。

三、操作

1.用巴比妥鈉緩沖液配制1.5%瓊脂糖液，在水浴煮溶，置56℃水箱備用。

2.取巴比妥鈉緩沖液3.36ml入小三角燒瓶內，再加抗人apob抗血清0.04ml，充分混和，預溫至56℃。

3.在預溫至56℃的3.4ml抗血清緩沖液內，加入1.5%瓊脂糖3.5ml，混勻，立即倒入預封好的有機玻璃架內，待凝。

4.用打孔器按圖打孔，孔徑3mm。孔距3mm。

5.置凝膠板于水平電泳槽內，兩極用三層濾紙搭橋，抗原一端接陰極，另一端接陽極。

6.以電壓12v/cm通電，用微量進樣器準確加入等測血清5μl(1：20或1：30稀釋)。

電泳2～3h后，關閉電源，置凝膠板于10.0%三氯醋酸液固定15～20min，取出膠板，在黑色背景燈光下量取沉淀峰高度。

7.計算

(1)查標準曲線。

(2)按下式計算：

8.如果需要也可將凝膠板置0.9% nacl液漂洗過夜更換蒸餾水漂洗，底板襯以硬薄膜，爾后置染色液染色，脫色后可見明顯的沉淀峰，干燥，以便長期保存。