2D PAGE：DIGE 熒光差異蛋白表達分析

Ettan DIGE熒光差異蛋白表達分析系統在傳統雙向電泳技術的基礎上，結合了多重熒光分析的方法，在同一塊膠上共同分離多個分別由不同熒光標記（Cy2，Cy3，Cy5）的樣品，并第一次引入了內標的概念，極大地提高了結果的準確性，可靠性和重復性。在DIGE技術中，每個蛋白點都有它自己的內標，并且軟件全自動根據每個蛋白點的內標對其表達量進行校準，保證所檢測到的蛋白豐度變化是真實的。DIGE技術可檢測到樣品間小于10%的蛋白表達差異，統計學可信度達到95%以上。利用Ettan DIGE技術還可以對微量（少到5μg）樣本進行蛋白質組學分析。

 

 

在Biomedical Node of the Australian Proteome Analysis Facility的網站中有關于DIGE原理的動畫。如有興趣，可以從以下鏈接瀏覽http://www.proteomics.usyd.edu.au/movies/dige.swf

1、相對于2D，在檢測大量樣品時，由于不同樣品可以跑同一塊膠，大大減輕了工作量。

2、檢測靈敏度更高  Detection Limit = 125 pg protein，大大節約了樣品，特別是不易得到的珍貴樣品。

3、檢測動態范圍更大—Dynamic range 10⁴ -10⁵，

4、內標歸一化 —— 采用內標而消除了膠與膠之間的差異造成的誤差

5、統計學分析—— 利用DeCyder軟件可以得到統計學可信的結果，極大降低操作者之間的偏差，并且將手工操作時間減少到幾分鐘。

 

IEF: IPG-PhorII (GE) and Protean IEF (BioRad)

GE Ruby SE600 (16x16cm)

GE Ettan DALTsix (26x20cm)

BioRad Criterion pre-cast (13x9cm)

BioRad Protean (8.6x7cm)

GE Typhoon 9400 Scanner

GE DeCyder for DIGE gels