動物源性食品中6種玉米赤霉醇類藥物殘留檢測

高效液相色譜-串聯質譜法檢測動物源性食品中6種玉米赤霉醇類藥物殘留

丁濤1，徐錦忠1，劉飛2
1．江蘇出入境檢驗檢疫局食品實驗室；2. 賽默飛世爾科技（上海）公司色譜質譜部

關鍵詞：TSQ Quantum, 玉米赤霉醇類藥物，雌激素類藥物, LC/MS/MS

玉米赤霉醇（zeranol，ZER），屬于雷索酸內酯類非甾體同化激素。ZER作為牛羊促生長劑，以耳根埋植的形式應用，促進蛋白質的合成，能提高胴體瘦肉率及飼料轉化率。但是，玉米赤霉醇具有弱雌激素作用，在動物尿液中的殘留會引起人體性機能紊亂及影響第二性征的正常發育，在外部條件誘導下，還可能致癌。ZER排出動物體外后，還可經飲水和食物造成二次污染及環境污染。1998年歐盟禁止將玉米赤霉醇等激素類藥物應用于畜禽養殖，我國農業部第235號公告明確規定玉米赤霉醇禁用于所有食品動物，所有可食動物尿液不得檢出。由于玉米赤霉醇作為牛羊增重劑效果好，經濟回報高，仍有違法使用的現象。

目前國際上動物性食品中玉米赤霉醇殘留儀器檢測方法主要有液－質聯用法和氣－質聯法法。本文建立了豬、牛、羊及雞肌肉和肝臟、牛奶和雞蛋等動物源性食品中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮等6種玉米赤霉醇類藥物的液相色譜-串聯質譜測定方法。

1. 實驗部分

1.1 儀器與試劑

TSQ Quantum三重四極桿串聯質譜儀（賽默飛世爾科技Thermo Fisher Scientific公司），配置有電噴霧電離源（ESI）；Surveyor MS Pump液相色譜系統，包括Surveyor AS自動進樣器。
標準品α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮純度均大于97 ％。用甲醇溶解并配制成1.0 mg/mL標準儲備液，再根據需要稀釋成適當含量的混合標準工作液。其他試劑均為HPLC色譜純。

1.2 樣品制備

1.2.1 取樣
    稱取約500 g動物肌肉、肝臟，完全切碎后，勻漿備用；取10枚鮮蛋，去殼，均質備用；取鮮牛奶500 mL，混勻備用

1.2.2 提取
試樣5 g，置于50 mL離心管中，加入乙腈10 mL，渦旋混合1 min，離心10 min（5000 r/min），取上清液轉移至另一離心管中。重復提取一次，合并兩次提取液并移取15 mL于另一離心管中，氮氣流下吹至小于1 mL（50 ℃），用3 mL 0.1 mol/L NaOH調節pH＝11.0，離心5 min（5000 r/min），待凈化。

1.2.3 凈化
用MCX固相萃取柱進行SPE凈化。依次用甲醇、水各2 mL活化固相萃取柱后，上樣，抽干，然后用5 ％甲酸甲醇溶液3 mL洗脫。收集洗脫液，洗脫液在下 N2流下吹干（50 ℃），殘渣以20 ％乙腈水溶液1.0 mL溶解，過0.45 μm濾膜，供LC/MS/MS法測定。

1.3 液相色譜及質譜條件

1.3.1 色譜條件
色譜柱：Thermo Hypersil Gold (150 × 2.1 mm,5 μm)；梯度洗脫見表1，其中A：水（0.1%甲酸）；B：乙腈；流速：250 μL/min；進樣量：10 μL。

表1 流動相梯度洗脫條件

1.3.2 質譜條件
電噴霧電離源（ESI），負離子模式；選擇反應監控（SRM）掃描模式，噴霧電壓：3500 V；離子傳輸管溫度：350 ℃；氮氣作為鞘氣和輔助氣，其中鞘氣為40 arb, 輔助氣為8玉米赤霉烯酮 arb，氬氣用作碰撞氣, 碰撞壓力為1.5 mTorr; 選擇反應監測（SRM）離子對見表2。

表2. 6種玉米赤霉醇類藥物的SRM質譜條件

注：下劃線碎片離子為定量離子

2 結果與討論

2．1  方法靈敏度  （定量限，LOQ）：

本方法在豬、牛、羊及雞肌肉和肝臟、牛奶和雞蛋等動物源性食品中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、 β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的檢測限均可達到0.1 μg/kg，本方法在各肌肉組織、雞蛋、牛奶中的α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的定量限為1.0  μg/kg。圖2為得到的典型LC/MS/MS色譜圖。

1. 玉米赤霉烯酮，2. α-玉米赤霉烯醇，3. β-玉米赤霉烯醇，4. 玉米赤霉酮，5. α-玉米赤霉醇，6. β-玉米赤霉醇

2.2 方法準確度：

本方法玉米赤霉醇類藥物在豬、牛、羊及雞肌肉和肝臟、牛奶和雞蛋等動物源性食品中的提取回收率均可達65 ～ 115 %。

3 結論

本方法建立了玉米赤霉醇類藥物在豬、牛、羊及雞肌肉和肝臟、牛奶和雞蛋等動物源性食品中的LC/MS/MS檢測方法，其基本原理為：樣品中的玉米赤霉醇類藥物經乙腈提取，提取液在堿性條件下經MCX固相萃取柱凈化后，高效液相色譜－串聯質譜（LC/MS/MS）法檢測。方法靈敏度、提取回收率、重現性等均滿足國內外監控和檢測要求。