本標準作為進出口食品安全檢測系列標準的重要組成部分,針對動物源性飼料成分鑒定需求,采用PCR橫向流動試紙條技術實現快速檢測。2019年10月25日發布,2020年5月1日正式實施。
技術環節 | 關鍵技術 | 參數要求 |
---|---|---|
DNA提取 | CTAB法 | 純度A260/A280=1.7-1.9 |
PCR擴增 | 特異性引物 | 退火溫度55℃ |
試紙條檢測 | FITC/生物素雙標記 | 檢測限0.1% |
采用CTAB裂解緩沖液(20g/L CTAB+1.4mol/L NaCl)在65℃水浴1小時,經氯仿/異戊醇抽提后,用70%乙醇沉淀DNA。特別注意樣本量需≥100mg以保證提取效率。
標準反應體系包含:
- 2μL 10×PCR緩沖液(含20mM Mg2+)
- 0.8μL上下游引物(5μmol/L)
- 0.2μL ExTaq酶(5U/μL)
- 1μL DNA模板(4ng/μL)
需同時滿足以下條件:
1. 陽性對照:質控線和檢測線均顯色
2. 陰性對照:僅質控線顯色
3. 樣本檢測:兩條線顯色判定為陽性,與NCBI數據庫比對相似度需≥97%
與傳統ELISA方法相比,本標準的PCR-橫向流動試紙條技術具有:
- 檢測時間縮短至3小時(原需8小時)
- 靈敏度提高10倍(0.1% vs 1%)
- 可同時檢測FITC和生物素雙標記產物
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本標準規定了動物源性食品中馬爾他勒菌的檢測方法。
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