細胞增殖檢測：CFSE原理和CFSE配制
一、原理
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熒光染料CFSE， 也可稱為CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl
ester）
即羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂，是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀酰亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，這使得CFSE成為一種良好的細胞標記物。當CFSE以含有兩個乙酸基團和一個succinimidyl
ester功能基團的形式存在時，不具有熒光性質，而具有細胞膜通透性，能夠自由進入細胞；而當其擴散進入細胞內環境，內源的酯酶可將其乙酸基團水解，此種形式的CFSE分子具有很高的熒光活性，被激發能夠產生綠色熒光，卻不再具有膜通透性；同時，其含有的succinimidyl
ester基團能與胞內的細胞骨架蛋白中的游離胺基反應，最終形成具有熒光的蛋白加合物。因此，當細胞進行分裂增殖時，具有熒光的胞質蛋白被平均分配到第二代細胞中，這樣與第一代細胞相比，其熒光強度便會減弱至一半；以此類推，分裂得到的第三代細胞的熒光強度便會比第二代細胞再次減弱。這種現象可以在
488nm的激發光下，采用流式細胞儀檢測分析，通過檢測到細胞熒光強度不斷的降低，進一步分析得出細胞分裂增殖的情況。
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二、CFSE配制
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用DMSO溶解成5 mmol/L的儲存液，于- 20
℃避光保存。使用時，用無血清DMEM培養液稀釋成5μmol/L的工作液備用。CFSE試劑盒內有一小瓶CFSE（A試劑）標明500ug
，另有一小瓶DMSO（B試劑），500ugCFSE溶解于180ulDMSO即是5mMstock solution。
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三、CFSE標記細胞
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制作細胞懸液，加入等體積CFSE工作液，于37℃孵育10 min，用40%體積的冷小牛血清立即終止標記10min。 離心洗滌兩次后，用適量的完全培養液重懸細胞。
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CFSE的濃度國外報道從0.5uM~20uM都有，建議終濃度為2.5-5uM。濃度太低，細胞標記的熒光強度不夠，太高了對細胞有毒性，且影響細胞增殖。標記孵育時要經常搖勻。
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技術原理
