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    使用CytoFLEX流式細胞儀+熒光染料CFSE檢測細胞增殖

    2020.5.27

    熒光染料CFSE(CFDA-SE),是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料,可以標記活體細胞。其基本原理如下:CFSE能夠輕易穿透細胞膜,在活細胞內與胞內蛋白共價結合,水解后釋放出綠色熒光。在細胞分裂增殖過程中,它的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減,標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強度是親代細胞的一半,根據這一特性,它可被用于檢測細胞增殖,細胞周期的估算及細胞分裂等方面。

    材料與方法
    1.試劑
    2016121135856248.jpg

    2.樣品制備
    201612113592926.jpg

    數據分析
    在FSC/SSC上圈出淋巴細胞,使用FSC-W/FSC-A排除黏連體,CFSE/CD19圖中圈出CD19陽性細胞,使用CFSE單參分別看淋巴細胞與CD19陽性(B細胞)的增殖情況。


    結果
    對照組:
    2016121135914720.jpg

    實驗組:
    2016121135923331.jpg?

    結果顯示,經過CpG 刺激3 天后的CD19 陽性細胞增殖效率比對照組有明顯的提升(23.44%:18,70%)。
    CytoFLEX 能明顯的區分淋巴細胞增殖的不同代數,從圖中看至少有明顯的5 代細胞,而且CD19 陰陽性區分也十分明顯,體現出了出眾的儀器靈敏度與分辨率。


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