粒系、紅系祖細胞體外培養
【參考值】
粒系祖細胞體外瓊脂培養:
正常骨髓:細胞叢與集落數之比為5~20:1CFU-C 約為50~70/105有核細胞。CFU-C濃度約為骨髓的1/10。CFU-E?為66/105有核細胞:
BFU-E
正常外周血:
集落的產率影響因素很多,各實驗室報告均不一致,所以各實驗室應建立自己的參考值。
【臨床意義】
一般認為造血干細胞是一類特殊組織中的原始細胞,依靠這類細胞的增殖分化,而不是依靠機體的其它組織所提供的細胞來維持這類組織的功能和恒定的細胞群或恒定的細胞數量。從
目前用于造血干細胞的研究方法主要有:脾結節測定法、體外瓊脂培養法、體內擴散盒瓊脂培養法,擴散盒造血干細胞測定法、促紅細胞生成素(
骨髓在體外瓊脂培養中,當在培養體系中加入一定量的細胞團生成刺激因子或稱集落刺激因子(
在醋酸地依紅染色中,在低倍鏡下見到集落有三種類型:
致密型(
混合型(
疏散型(
自從骨髓細胞在
造血干細胞與臨床血液疾患的關系極為密切,已有許多資料證明,大多數再生障礙性貧血是由于造血干細胞數量的減少或質量異常所致,少數可能由于造血環境或免疫異常引起。白血病則認為是干細胞的癌變,導致其分化與增殖失去平衡,增殖減慢,成熟受阻
幾種血液疾患造血干細胞的改變(表
表
為13/105有核細胞BFU-E?為2~38/105有核細胞1961年發現脾結節生成的實驗技術后,造血干細胞的研究得到了進一步發展。1965年以后又相繼地出現了骨髓細胞體外瓊脂培養等技術,為深入研究和認識造血干細胞的增殖和分化特性,以及造血干細胞群中多向性造血干細胞與各類定向祖細胞之間的相互關系提供了重要的研究手段。EP)反應細胞測定法,體外血漿凝塊培養等。Colony stimulation factor CSF)后,一般經過7天培養后,可以生成由粒細胞、單核—巨噬細胞或兩者混合組成的細胞團,在瓊脂培養中每生成的一個細胞團稱為一個細胞團生成單位(Colony forming unit-calture,CFU-C)。在瓊脂培養中,50個以上細胞聚集在一起稱為集落,3-49個細胞聚集在一起稱為叢(Claster)。Colse type):主要由不同發育階段的粒細胞系統的細胞組成。?Mixed type):細胞團的中央為密集的粒細胞,周圍環境疏散分布的單核—巨噬細胞。?Loose type):主要由單核—巨噬細胞組成。?CSF作用下可以在體外瓊脂培養體系中生成由粒細胞和單核—巨噬細胞組成的細胞集落后,1971年發現造血細胞在體外血漿凝塊培養中,在培養體系中加入適量促紅細胞生成素(EP)的條件下,經過短期培養后生成了由紅系細胞組成的細胞團或稱集落,為了區別于粒細胞組成的細胞團(CFU-C或CFU-C)將紅系細胞組成的細胞團稱為CFU-E(Colony Forming Unit Respondstoerythropoietin)。?。急性粒細胞性白血病患者,體外研究發現CFU-C增殖異常,特點是集落生成少或無,但有大量細胞叢生成,集落和叢由原始、幼稚和成熟缺陷的粒細胞組成。還有大量的殘存的單個原始細胞散在瓊脂中,在白血病治療前呈“非白血病型生長(集落生成減低或不生長)”與呈“非白血病型生長(有小叢和大叢或殘存原始細胞)”相比,前者的完全緩解率比后者為高。在誘導緩解期瓊脂培養出現正常集落者,予示將會得到緩解。因此CFU-C體外瓊脂培養對估計急性粒細胞白血病的預后和指導治療具有一定意義。在對MDS研究中,發現多數造血組織增生征患者的血清和尿中CSF水平增高,如果出現“白血病型生長”集落,多數患者會在10個月內發生白血病。陣發性睡眠性血紅蛋白癥、真性紅細胞增多癥等也是造血干細胞異常的疾病,因此深入研究造血干細胞的生長特性及增殖分化的調節和控制已成為當前血液學研究中一個活躍領域。測定正常及各種血液疾患的骨髓和外周血中CFU-C、CFU-E、BFU-E等的變化可為血液疾患的治療預后提供有用幫助,對于預測骨髓移植后的恢復狀況,評價化療藥物對正常細胞的影響以及深入認識發病原理等都有一定的價值。2-2)2-2?幾種血液疾患造血干細胞的改變
CFUc | CFUe | |
急性粒細胞白血病 | 顯著減少或消失 | 顯著減少或消失 |
急性粒細胞白血病( CR) | 正常 | 正常 |
急性淋巴細胞白血病 | 顯著減少或消失 | 顯著減少或消失 |
慢性粒細胞白血病 | 增加 | 正常 |
慢性粒細胞白血病急變 | 顯著減少 | 減少 |
紅白血病 | 減少 | 減少 |
白血病前期 | 顯著減少 | 無一定傾向 |
再生障礙性貧血 | 減少 | 減少 |
缺鐵性貧血 | 正常或增加 | 正常?減少? |
巨幼細胞貧血 | 正常或增加 | — |
陣發性睡眠性血紅蛋白尿 | 顯著減少,亦可正常 | — |
真性紅細胞增多癥 | 增加 | 增加? |
多發性骨髓瘤 | 顯著減少 | |
骨髓纖維化 | 顯著減少 |
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