霉菌的形態觀察實驗原理和操作步驟
一、實驗目的
1、學習自制水浸片觀察微生物的形態；
2、學習并掌握觀察霉菌形態的基本方法，了解四類常見霉菌的基本形態特征。
二、基本原理
霉菌可產生復什分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態特征是識別不同種類霉菌的重要依據。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多(約為3～10微米)，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。
三、實驗器材
1、菌種
青霉(Penicillium sp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、根霉（Rhizopus sp.）、毛霉（Mucor sp.）培養約2～5d的馬鈴薯瓊脂培養物。
2、溶液或試劑
乳酸石炭酸棉藍染色液、蒸餾水、50%乙醇、碘液。
3、器材
剪刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、解剖針、顯微鏡等。
四、實驗方法及步驟
1.水浸制片觀察法
在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液或蒸餾水，用解剖針從生長有霉菌的平板中挑取少量帶有孢子的霉菌菌絲，用50%的乙醇浸潤，再用蒸餾水將浸過的菌絲洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細地用解剖針將菌絲分散開來。蓋上蓋玻片（勿使產生氣泡，且不要再移動蓋玻片），先用低倍鏡，必要時轉換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結果。
2.玻璃紙透析培養觀察法
（1）玻璃紙的選擇與處理
要選擇能夠允許營養物質透過的玻璃紙。也可收集商品包裝用的玻璃紙，加水煮沸，然后用冷水沖洗。經此處理后的玻璃紙若變硬，必定是不可用的，只有那些軟的可用。將那些可用的玻璃紙剪成適當大小，用水浸濕后，夾于舊報紙中，然后一起放入平皿內121℃滅菌30min備用。
（2）菌種的培養
按無菌操作法，倒平板，冷凝后用滅菌的鑷子夾取無菌玻璃紙貼附于平板上，再用接種環沾取少許霉菌孢子，在玻璃紙上方輕輕抖落于紙上。然后將平板置28— 30℃下培養3—5天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃紙上長出單個菌落（根霉菌的氣生性強，形成的菌落鋪滿整個平板）。
（3）制片與觀察
剪取玻璃紙透析法培養3—4天后長有菌絲和孢子的玻璃紙一小塊，先放在50%乙醇中浸一下，洗掉脫落下來的孢子，并趕走菌體上的氣泡，然后正面向上貼附于干凈載玻片上，滴加1—2滴乳酸石炭酸棉藍液，小心地蓋上蓋玻片（注意不要產生氣泡），且不要移動蓋玻片，以免搞亂菌絲。
標本片制好后，先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。注意觀察菌絲有無隔膜，有無假根、足細胞等特殊形態的菌絲。注意其無性繁殖器官的形狀和構造，孢子著生的方式和孢子的形態、大小等。
五 注意事項
1、制片時，應該挑取少量帶有孢子的菌絲，取的多，反而不宜觀察。
2、標本制好后，先用低倍鏡觀察，再用高倍鏡觀察。
