奧盛AMR-100酶標儀有哪些應用
一、蛋白質濃度測定
可見光吸收法
1.1 Lowry法
1.2 考馬斯亮藍法（Bradford）
1.3 BCA法
方法
靈敏度
原理
應用
檢測波長
改良的Lowry法
靈敏度高
TCA沉淀后的蛋白定量
750nm
考馬斯亮藍法
靈敏度高
考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其最大吸收峰由465nm變為595nm，改良法降低了不同蛋白質與染料結合后的顏色差異
蛋白質快速定量（可耐受大多數的還原劑如BME、DTT等）
595nm
BCA法
靈敏度高
在堿性溶液中,蛋白質將二價銅(CU2+)還原成一價銅(CU+)后者與測定試劑中BCA（金雞寧）生成一個在562nm處具有最大光吸收的紫色復合物
蛋白質定量，尤其是膜蛋白定量(可耐受大多數的變性劑如SDS，TritionX-100等；不能耐受還原劑如DTT，BME，葡萄糖，抗壞血酸等)
562nm
二、細胞增殖及細胞毒性檢測
可見光吸收法
2.1 終點法
工作原理：
2.1.1 死細胞計數
--染料法：
細胞死亡后，細胞膜通透性增高，染料可以透過。
染料：臺盼藍，Cytorecon，PI等。
--比色法：
細胞死亡后，胞內物質釋放，可在培養基中檢出。
檢測對象：51Cr，LDH等
2.1.2 活細胞計數
--染料法：
活細胞的線粒體酶可以還原染料，產生有色產物。
染料：四氮唑鹽類（MTT，XTT，WST-1，CCK8/WST-8）等
檢測波長：450nm（XTT，WST-1，CCK8/WST-8），490nm或570nm（MTT）
參比波長：690nm
2.2 動力學法
2.2.1 動態監測細胞增殖和細胞毒性)
工作原理：
--細胞增殖過程中，細胞體內的環境由氧化環境變化成還原環境，呼吸鏈中的NADPH/NADP,
FADH/FAD,FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高。
--AlamarBlue被細胞內吞后，在細胞質中被上述代謝中間體還原，最后釋放到胞外。
--被還原AlamarBlue的積累使培養基從無熒光的靛青藍轉變成有熒光的粉紅色。
檢測波長：570nm
參比波長：600nm
三、細胞凋亡檢測檢測
工作原理：
--細胞凋亡的發生是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA，產生180~200bp或其數倍的
核小體片段，而核小體由于與組蛋白形成緊密復合物而不被核酸內切酶切割。
--應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結構，可特異性檢測細胞溶
解物中的核小體片段。
檢測方法：
--在微定量板上吸附抗組蛋白抗體，加入細胞裂解后離心所得的含有核小體的上清液，核小體上
的組蛋白與包被的抗組蛋白抗體結合；
--加入辣根過氧化物酶標記的抗DNA抗體，與核小體上的DNA結合；
--加酶的底物，測光吸收值。
檢測波長：405nm和492nm
四、報告基因檢測
五、信號轉導檢測
六、活性小分子檢測
七、內毒素檢測
八、過敏原檢測
九、其他酶類檢測
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