常見破膜劑如何選擇
常見破膜劑有：① 皂素；② 有機溶劑：乙醇、甲醇、丙酮等；③ Triton-X、Tween-20。 破膜劑選擇原則： ① 盡量保持細胞形態，使可根據散射光信號分析細胞種類，如區分淋巴細胞、單核細胞和粒細胞； ② 不影響細胞膜表面抗原與抗體的特異性結合（若需同時檢測細胞內外抗原）。 常見破膜劑對比： ① 細胞形態影響：利用皂素破膜，外周血細胞的流式散射光圖中淋巴細胞、單核細胞和粒細胞分群清晰；而另兩種破膜劑，通過與細胞膜上的蛋白質和脂質作用發揮破膜效果，易導致細胞發生皺縮，這3群細胞很難分開； ② 對抗原影響：a.標記表面抗原和破膜兩步操作的先后順序有所影響：以檢測表面CD8為例，先標記再破膜對CD8無明顯影響，而先破膜再標記，乙醇和Triton-X會使表達CD8細胞比例和每個細胞上抗原表達量急劇下降；b.對不同抗原的影響不同：如檢測IFN-γ時，Triton-X破膜會導致其檢測率降低，而皂素和乙醇無影響；檢測TNF-α時，皂素的敏感性要高于其他兩種。 ③ 其他：皂素的破膜效果是可逆的，一旦被洗掉容易導致破膜失效，因此在后續實驗過程中需用含有皂素的洗滌液洗滌；有機溶劑可實現固定和破膜；Triton-X和Tween-20相似，可破壞所有脂質層，可破核膜。總體來說，皂素是相對理想的細胞破膜劑，但無法破核膜，若需破核膜還是要用Triton-X和Tween-20。
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