破膜劑的秘密（二）

流式染色中，最難的是破膜，了解破膜劑的秘密，能夠更好地進行胞內染色。
為什么要進行破膜？

很簡單，就是希望研究細胞內部的蛋白分子，正常情況下，熒光標記的抗體無法通過完整的細胞膜，只能在細胞膜上打出足夠大的孔，才能使抗體進入細胞內。

一般，破膜主要分為以下幾步：

（1）用醛類（多聚甲醛、甲醛、戊二醛）或有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酮）固定或穩定細胞膜。

醛類在固定的同時可以增加細胞滲透性，但還不足以使抗體進入。但如果用有機溶劑固定，那么后續的破膜就不需要了。

（2）用去污劑或溶劑破膜。

（3）將細胞與胞內抗體或標記物孵育。

我什么時候需要用去污劑？

用去污劑最常見的應用有：

（1）洗液：在PBS洗液中加入低濃度的去污劑可以減少一些非特異性染色，這個技巧不知道吧？千萬別告訴別人：）

（2）破膜：對細胞膜打孔，實現胞內抗原染色。

（3）溶解細胞膜：用去污劑可提取細胞膜成分，進行免疫共沉淀分析。

什么是去污劑？工作原理是什么？

見下圖，去污劑由多個單體分子組成，每個單體分子均有親水的頭部和疏水的尾部（圖中的a），在高濃度情況下，多個單體分子組合成一個聚合分子（圖中的b）。當去污劑與細胞膜脂質層作用時，就能夠嵌入到脂質分子中間，隨著濃度增加，去污劑就會影響細胞膜結構，使膜上現成小孔（圖中的c）。如果濃度進一步增加，去污劑就會把膜成份解離下來，包裹起來，這就是為什么用去污劑處理后膜的成份會丟失。